Pipetty電動移液器在登革熱血清檢測（Mac-ELISA）中的應用

方案摘要：本方案聚焦 Pipetty 電動移液器在登革熱血清檢測（Mac - ELISA）中的應用。Mac - ELISA 檢測登革熱血清時，對移液精度與效率要求較高。Pipetty 電動移液器憑借獨特優(yōu)勢脫穎而出，其內(nèi)置溫度傳感器，能依據(jù)溫度自動校正分配量，規(guī)避手溫干擾，保障移液精度。連續(xù)分液功能可將設定液量多次等量排出，極大提升 96 孔板等加樣效率。且該移液器輕巧便攜，操作方式多樣，可顯著減輕實驗人員負擔，助力登革熱血清檢測高效、精準開展，有力推動相關檢測工作的順利進行 。
 
方案詳情：
一、實驗原理
      根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，利用抗人μ鏈單克隆抗體捕獲待檢測血清中的IgM，再加入特異性抗原和相應酶標單克隆抗體，加底物顯色。顯色程度與特異性IgM抗體含量呈正相關。
二、‌實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC01-02-1000及配套吸頭。
② 洗板機。
③ 酶標儀。
④ 恒溫溫箱或水浴箱(37℃±2℃)。
⑤ 10mL 吸管。
⑥ 稀釋血清用的試管。
⑦ 吸水紙。
 
2、試劑和材料
① 登革病毒 IgM 抗體捕捉 ELISA 診斷試劑盒。
② 蒸餾水或去離子水。
③ TMB（四甲基聯(lián)苯胺）。
④ 病人標本。
 
三、實驗步驟
1、使用Pipetty電動移液器，設置混勻模式，將陰、陽性對照血清，臨界值較準血清和待檢血清按照試驗需求稀釋成1：100；吸取所需量的純化登革病毒抗原和等體積辣根過氧化物酶標記單克隆抗體轉(zhuǎn)移至干凈的試管中，自動混勻后置室溫作用 1h；
 
2、使用一鍵混勻功能，混合好標記單克隆抗體和抗原后，在 10min 內(nèi)各吸取100μL稀釋好的病人標本和對照血清至測試板上相應的微孔中，37℃作用 1h；
 
3、用Pipetty棄掉血清后，用洗滌液重復洗滌6次，吸水紙上扣干，使用連續(xù)分液功能，分別加100μL上述作用好的登革病毒抗原和酶標單克隆抗體復合物，37℃作用 1h；
4、棄登革病毒抗原和酶標單克降抗體復合物，用洗滌液重復洗滌6次，吸水紙上扣干，使用連續(xù)分液功能，每孔加入100 μL的 TMB（四甲基聯(lián)苯胺），室溫作用 10min 充分顯現(xiàn)藍色后，每孔加入 100 μL的終止液，一鍵混勻；
5、在 30min 內(nèi)于450nm 波長處讀取每孔的吸光度。
 
四、試驗結(jié)果
判斷標準為：在NC/C0<1且PC/C0>1的情況下，若S/C0<0.9，則結(jié)果為陰性，若S/C0>1.1，則結(jié)果為陽性，若S/C0=0.9~1.1，則標本需重做。
注：S為待檢血清的吸光度；NC為陰性對照血清的吸光度；PC為陽性對照血清的吸光度；C0為臨界較準血清的吸光度平均值。