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RNA m6A甲基化測(cè)序
康成生物基于Illumina高通量測(cè)序平臺(tái),為您提供一站式RNA m6A測(cè)序技術(shù)服務(wù),您只需要提供保存完好的組織或細(xì)胞標(biāo)本,康成的技術(shù)服務(wù)人員就可為您完成全部實(shí)驗(yàn)操作,并提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
服務(wù)類別:測(cè)序/合成總訪問:800
最后更新:2018-11-26半年訪問:46
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       m6A(N6-methyladenosine,6-甲基腺嘌呤)是真核生物mRNA內(nèi)部序列中最常見的一種甲基化修飾,同時(shí)可以功能性的調(diào)節(jié)真核生物的轉(zhuǎn)錄組從而影響mRNA的剪接、出核、定位、翻譯和穩(wěn)定。m6A RNA出現(xiàn)在多種重要的細(xì)胞生命過程中,意味著mRNA甲基化參與了多種生物學(xué)過程,如干細(xì)胞分化、生物節(jié)律等,同時(shí)也參與了多種疾病的發(fā)生,包括腫瘤、肥胖和不育等。

圖1:m6A甲基化和去甲基化示意圖

       目前對(duì)m6A的轉(zhuǎn)錄組研究方法為MeRIP-seq(mRNA甲基化測(cè)序)的方法,其原理是通過m6A特異性抗體對(duì)細(xì)胞內(nèi)具有m6A修飾的RNA片段進(jìn)行免疫共沉淀,將富集下來的RNA片段進(jìn)行高通量測(cè)序。結(jié)合生物信息學(xué)分析,即可在轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)對(duì)m6A修飾進(jìn)行系統(tǒng)研究。

服務(wù)特點(diǎn)
靈活度高:能夠直接對(duì)任意物種的轉(zhuǎn)錄組高甲基化片段進(jìn)行測(cè)序,無需已知的基因組序列信息。
檢測(cè)范圍廣:覆蓋整個(gè)轉(zhuǎn)錄組范圍的甲基化區(qū)域。
精確度高:能夠在實(shí)際結(jié)合位點(diǎn)100-200個(gè)堿基范圍內(nèi)精確定位。
數(shù)字化信號(hào):直接對(duì)甲基化片段進(jìn)行定量和測(cè)序,不存在傳統(tǒng)芯片雜交的熒光模擬信號(hào)帶來的交叉反應(yīng)和背景噪音問題。

實(shí)驗(yàn)流程


  圖2:MeRIP-seq實(shí)驗(yàn)流程圖 

結(jié)果展示

1.m6A甲基化峰分析

 

 
表1:m6A甲基化譜數(shù)據(jù)列表

2.m6A甲基化峰注釋
       利用最新的RefSeq數(shù)據(jù)庫,每個(gè)峰通過與其最鄰近基因位置關(guān)系對(duì)甲基化峰進(jìn)行注釋,分成:外顯子峰,內(nèi)含子峰,非翻譯區(qū)峰,基因間m6A峰。

圖3:m6A甲基化峰分布圖。

3. m6A甲基化峰的可視化

       m6A甲基化測(cè)序結(jié)果中的wig文件能夠上傳到基因組瀏覽器中,以便進(jìn)行m6A信號(hào)區(qū)域的可視化。

圖4:可視化分析

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