流感疫苗（H5N1）中宿主殘留DNA片段大小分析方法的建立、驗證及應用

武漢生物制品研究所有限責任公司與湖州申科生物技術股份有限公司聯(lián)合攻關，共同發(fā)表《大流行流感全病毒滅活疫苗（H5N1）中宿主殘留DNA片段大小分析方法的建立、驗證及應用》核心文獻（《中國生物制品學雜志2025年12月第38卷第12期》），為流感疫苗質(zhì)量安全管控提供技術支撐！

一、研究背景
在疫苗生產(chǎn)中，Vero、MDCK等哺乳動物細胞基質(zhì)已成為主流選擇，但隨之而來的宿主細胞殘留DNA（HCD）風險始終是全球監(jiān)管焦點。大片段殘留DNA（＞200bp）可能攜帶癌基因或潛伏病毒序列，存在致瘤、感染等潛在風險，WHO、FDA等機構(gòu)均明確要求嚴控其片段大小與總量。此前，H5N1疫苗領域缺乏標準化的HCD片段大小分析方案，成為工藝優(yōu)化與合規(guī)申報的關鍵瓶頸。

二、研究內(nèi)容
該研究采用磁珠法提取樣品 HCD，通過設計特異性引物與探針，構(gòu)建了可分別定量84、142、204及504bp DNA片段的實時熒光定量 PCR（qPCR）分析方法。

經(jīng)系統(tǒng)驗證，4 種片段標準品在 0.003~300 pg/µL 范圍內(nèi)與 Ct 值均呈良好線性關系（R²均>0.99），其中 84、142、204bp的定量限為3 fg/µL，504bp的定量限達1 fg/µL，高、中、低濃度加標樣品回收率在50%-150%范圍內(nèi)，精密性、耐用性及專屬性驗證的CV均≤40%，展現(xiàn)出優(yōu)異的檢測性能。

將該方法應用于疫苗生產(chǎn)過程樣品檢測發(fā)現(xiàn)，收獲液中≥204bp的大片段 HCD 占比高達81.0%，HCD總含量為689.9 ng/mL，經(jīng)過酶解和純化工序后，原液中≥204 bp 片段占比降至8.9%，≥504bp片段未檢出，總HCD含量也降至10.2 ng/mL。

三、研究結(jié)論與意義
以上數(shù)據(jù)結(jié)果充分證明該方法能精準反映生產(chǎn)工藝對HCD的清除效果。該方法的成功應用，不僅提升了H5N1疫苗的安全邊際，其技術思路還可遷移至狂犬病、脊灰、輪狀病毒等各類細胞基質(zhì)疫苗的質(zhì)量控制中，為整個疫苗行業(yè)的HCD風險管控提供可借鑒的標準化路徑。為疫苗生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制提供了可靠技術支撐。

引用文獻：
邱冉,張青梅,樂洋,等. 大流行流感全病毒滅活疫苗（H5N1）中宿主殘留DNA片段大小分析方法的建立、驗證及應用 [J]. 中國生物制品學雜志, 2025, 38 (12): 1451-1456+1468.