TRIM47通過靶向HNF4α進行泛素-蛋白酶體降解來促進肝細胞癌的研究
肝細胞核因子4α(HNF4α)下調(diào)是肝細胞癌（HCC）發(fā)病機制中的一個關(guān)鍵事件，但在HCC中的降解機制仍不清楚。三聯(lián)基序47(TRIM47)是TRIM家族的典型E3泛素連接酶，與多種腫瘤有關(guān)，其在HCC進展中的具體作用尚未完全闡明。近期海軍軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院（上海長征醫(yī)院）謝渭芬、張新、王珂琪團隊在Acta Pharmaceutica Sinica B (IF 14.6)上發(fā)表文章“Blocking TRIM47-mediated HNF4α degradation suppresses hepatocellular carcinoma progression”，發(fā)現(xiàn)TRIM47通過靶向HNF4α進行泛素-蛋白酶體降解來促進肝細胞癌進展。
維真病毒產(chǎn)品：Ad-HNF4α (K470R)
體外感染細胞：Huh7細胞
體內(nèi)實驗動物：Huh7細胞異種移植裸鼠
體內(nèi)注射方式：瘤內(nèi)注射
體內(nèi)病毒用量：2×10^9 pfu
1. TRIM47與HNF4α相互作用并負向調(diào)節(jié)其在HCC細胞中的功能
作者發(fā)現(xiàn)HCC樣本中TRIM47水平顯著升高，并且這種上調(diào)與較短的總生存期相關(guān)。免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)HNF4α是TRIM47的潛在靶點，原位鄰近連接和Co-IP實驗證明HNF4α與TRIM47存在相互作用。由于HNF4α是HCC的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑和治療靶點，作者進一步研究了TRIM47在調(diào)節(jié)HNF4α功能中的作用。熒光素酶報告基因檢測表明，TRIM47過表達顯著抑制HNF4A轉(zhuǎn)錄活性，而TRIM47敲低則增強其轉(zhuǎn)錄活性；qRT-PCR分析證實TRIM47的過表達抑制了HCC細胞中HNF4A靶基因的表達，但TRIM47敲低上調(diào)了HNF4A靶基因，同時HNF4A耗竭則消除了這些轉(zhuǎn)錄變化。這些結(jié)果表明TRIM47對HNF4A功能的抑制作用。機制研究發(fā)現(xiàn)TRIM47通過介導(dǎo)K48連接的HNF4α泛素化和蛋白酶體降解，抑制HNF4α的蛋白水平。
維真病毒產(chǎn)品：Ad-HNF4α (K470R)
體外感染細胞：Huh7細胞
體內(nèi)實驗動物：Huh7細胞異種移植裸鼠
體內(nèi)注射方式：瘤內(nèi)注射
體內(nèi)病毒用量：2×10^9 pfu
1. TRIM47與HNF4α相互作用并負向調(diào)節(jié)其在HCC細胞中的功能
作者發(fā)現(xiàn)HCC樣本中TRIM47水平顯著升高，并且這種上調(diào)與較短的總生存期相關(guān)。免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)HNF4α是TRIM47的潛在靶點，原位鄰近連接和Co-IP實驗證明HNF4α與TRIM47存在相互作用。由于HNF4α是HCC的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑和治療靶點，作者進一步研究了TRIM47在調(diào)節(jié)HNF4α功能中的作用。熒光素酶報告基因檢測表明，TRIM47過表達顯著抑制HNF4A轉(zhuǎn)錄活性，而TRIM47敲低則增強其轉(zhuǎn)錄活性；qRT-PCR分析證實TRIM47的過表達抑制了HCC細胞中HNF4A靶基因的表達，但TRIM47敲低上調(diào)了HNF4A靶基因，同時HNF4A耗竭則消除了這些轉(zhuǎn)錄變化。這些結(jié)果表明TRIM47對HNF4A功能的抑制作用。機制研究發(fā)現(xiàn)TRIM47通過介導(dǎo)K48連接的HNF4α泛素化和蛋白酶體降解，抑制HNF4α的蛋白水平。
2. 阻斷HNF4α的泛素化可減輕TRIM47對HCC的有害影響
泛素測定顯示，HNF4α的K470R突變顯著降低了TRIM47介導(dǎo)的HNF4α泛素化，此外K470R突變延遲了CHX處理的過表達TRIM47的Huh7細胞中HNF4α的降解，導(dǎo)致HNF4α蛋白水平恢復(fù)。熒光素酶報告基因檢測表明，K470R突變顯著恢復(fù)了TRIM47介導(dǎo)的HNF4α轉(zhuǎn)錄活性抑制。鑒于TRIM47介導(dǎo)HNF4α的降解，作者研究了抑制這種降解是否可以減弱TRIM47驅(qū)動的HCC進展。使用Ad-HNF4α和Ad-HNF4α-K470R感染TRIM47過表達的Huh7細胞，發(fā)現(xiàn)TRIM47對增殖、遷移、侵襲和集落形成的促進作用被HNF4α-K470R消除了。裸鼠皮下移植實驗發(fā)現(xiàn)AdHNF4α-K470R逆轉(zhuǎn)了TRIM47誘導(dǎo)的腫瘤生長、體積和重量的增加。蛋白質(zhì)印跡和IHC分析顯示，HNF4α蛋白水平因TRIM47過表達而降低，但被Ad-HNF4α-K470R恢復(fù)。Ki67的IHC染色進一步支持Ad-HNF4α-K470R強烈抑制TRIM47誘導(dǎo)的小鼠腫瘤增殖。這些數(shù)據(jù)表明，通過突變K470來阻斷HNF4α泛素化可有效穩(wěn)定HNF4α，從而阻止TRIM47加重的HCC的進展。
泛素測定顯示，HNF4α的K470R突變顯著降低了TRIM47介導(dǎo)的HNF4α泛素化，此外K470R突變延遲了CHX處理的過表達TRIM47的Huh7細胞中HNF4α的降解，導(dǎo)致HNF4α蛋白水平恢復(fù)。熒光素酶報告基因檢測表明，K470R突變顯著恢復(fù)了TRIM47介導(dǎo)的HNF4α轉(zhuǎn)錄活性抑制。鑒于TRIM47介導(dǎo)HNF4α的降解，作者研究了抑制這種降解是否可以減弱TRIM47驅(qū)動的HCC進展。使用Ad-HNF4α和Ad-HNF4α-K470R感染TRIM47過表達的Huh7細胞，發(fā)現(xiàn)TRIM47對增殖、遷移、侵襲和集落形成的促進作用被HNF4α-K470R消除了。裸鼠皮下移植實驗發(fā)現(xiàn)AdHNF4α-K470R逆轉(zhuǎn)了TRIM47誘導(dǎo)的腫瘤生長、體積和重量的增加。蛋白質(zhì)印跡和IHC分析顯示，HNF4α蛋白水平因TRIM47過表達而降低，但被Ad-HNF4α-K470R恢復(fù)。Ki67的IHC染色進一步支持Ad-HNF4α-K470R強烈抑制TRIM47誘導(dǎo)的小鼠腫瘤增殖。這些數(shù)據(jù)表明，通過突變K470來阻斷HNF4α泛素化可有效穩(wěn)定HNF4α，從而阻止TRIM47加重的HCC的進展。
3. CZ-2401治療可改善TRIM47驅(qū)動的HCC進展
通過虛擬篩選和藥理活性驗證，作者發(fā)現(xiàn)CZ-2401是TRIM47-HNF4α相互作用的有效抑制劑，能阻斷HNF4α-TRIM47相互作用，增強HNF4α穩(wěn)定性。然后作者評估了CZ-2401對體外過表達TRIM47的Hep3B細胞的影響。發(fā)現(xiàn)CZ-2401處理顯著減弱了TRIM47對細胞增殖、遷移、侵襲和集落形成的刺激作用，流式細胞術(shù)進一步證實CZ-2401抑制HCC細胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，增強其抗腫瘤功效。作者還建立了小鼠異種移植模型，發(fā)現(xiàn)TRIM47過度表達加劇了異種移植物中的腫瘤生長，但CZ-2401治療顯著減弱了這種效應(yīng)。作者進一步評估了異種移植腫瘤中HNF4α的表達，發(fā)現(xiàn)TRIM47過表達組的HNF4α蛋白水平顯著降低，相反，在TRIM47過表達的情況下，CZ-2401治療也會導(dǎo)致HNF4α水平顯著增加。Ki-67染色的IHC進一步證實了CZ-2401對TRIM47加速的腫瘤細胞增殖的抑制作用。這些數(shù)據(jù)表明CZ-2401顯示出良好的HCC治療的潛力。
通過虛擬篩選和藥理活性驗證，作者發(fā)現(xiàn)CZ-2401是TRIM47-HNF4α相互作用的有效抑制劑，能阻斷HNF4α-TRIM47相互作用，增強HNF4α穩(wěn)定性。然后作者評估了CZ-2401對體外過表達TRIM47的Hep3B細胞的影響。發(fā)現(xiàn)CZ-2401處理顯著減弱了TRIM47對細胞增殖、遷移、侵襲和集落形成的刺激作用，流式細胞術(shù)進一步證實CZ-2401抑制HCC細胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，增強其抗腫瘤功效。作者還建立了小鼠異種移植模型，發(fā)現(xiàn)TRIM47過度表達加劇了異種移植物中的腫瘤生長，但CZ-2401治療顯著減弱了這種效應(yīng)。作者進一步評估了異種移植腫瘤中HNF4α的表達，發(fā)現(xiàn)TRIM47過表達組的HNF4α蛋白水平顯著降低，相反，在TRIM47過表達的情況下，CZ-2401治療也會導(dǎo)致HNF4α水平顯著增加。Ki-67染色的IHC進一步證實了CZ-2401對TRIM47加速的腫瘤細胞增殖的抑制作用。這些數(shù)據(jù)表明CZ-2401顯示出良好的HCC治療的潛力。
本研究發(fā)現(xiàn)TRIM47靶向HNF4α進行泛素-蛋白酶體降解來促進肝細胞癌進展，HNF4α賴氨酸470處泛素化位點的突變顯著阻礙腫瘤生長。抑制TRIM47-HNF4α相互作用的小分子化合物CZ-2401可在體外和體內(nèi)有效抑制腫瘤進展，使CZ-2401成為未來HCC治療的潛在先導(dǎo)化合物。
- 呼吸系統(tǒng)5大熱門研究方向高分文章設(shè)計多因子檢測panel的方法
- 如何解決AAV 轉(zhuǎn)染實驗中由中和抗體引起的效率低
- 腺病毒入侵及感染細胞的具體過程
- 腺病毒載體的結(jié)構(gòu)、優(yōu)勢與局限性
- Cell文章：定時給予3dA增強PVN神經(jīng)元生物鐘節(jié)律可延緩衰老延長壽命
- 綜述解讀：Tn-Seq技術(shù)用于揭示細菌-宿主相互作用的機制進展
- 代碼分享：基于TCGA甲基化數(shù)據(jù)挖掘驗證分子表型代碼分享（第三期）
- 調(diào)控心血管穩(wěn)態(tài)的重要靶點NPR1的結(jié)構(gòu)、生理功能及應(yīng)用
Copyright(C) 1998-2026 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com