腺病毒腫瘤內(nèi)注射小鼠的病毒用量的影響研究

文章標(biāo)題：LncRNA EP300-AS1 interacts with PTBP1 to destabilize PRMT5 mRNA and suppresses NSCLC growth and metastasis
發(fā)表期刊：Cell Death & Disease，IF 9.6
合作客戶：北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院張德宇團(tuán)隊(duì)
維真助力：腺病毒
基因信息：LncRNA EP300-AS1
病毒產(chǎn)品：Ad-EP300-AS1-GFP
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：NTG小鼠
注射方式：腫瘤內(nèi)注射
注射量：5 x 10^8 pfu 、1 x 10^9 pfu
實(shí)驗(yàn)細(xì)胞：A549、EBC1
MOI：10、50、100、500

研究背景
非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是常見(jiàn)的惡性癌癥之一，其特征是轉(zhuǎn)移率和死亡率高，目前非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)和進(jìn)展的分子機(jī)制在很大程度上仍不清楚。在本研究中EP300 AS1被確定為非小細(xì)胞肺癌中一種關(guān)鍵的腫瘤抑制性長(zhǎng)非編碼RNA（lncRNA），在體外和體內(nèi)都能抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，并與更好的臨床結(jié)果相關(guān)，這為非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測(cè)和治療提供了一種新型的調(diào)節(jié)機(jī)制和有前途的靶點(diǎn)。

部分結(jié)果展示
1. EP300-AS1抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增生、遷移和侵襲
作者發(fā)現(xiàn)EP300-AS1是與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移和進(jìn)展相關(guān)的重要lncRNA，為了研究其在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用，作者在A549和EBC1細(xì)胞中敲低和過(guò)表達(dá)EP300-AS1。細(xì)胞增生、集落形成試驗(yàn)、傷口愈合分析表明，與對(duì)照細(xì)胞相比，敲低組細(xì)胞生長(zhǎng)得更快，細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)；相反過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的繁殖、遷移和侵襲能力降低。這些結(jié)果表明EP300-AS1在體外具有抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增生、遷移和侵襲的能力。接下來(lái)作者使用0、10、50、100和500 MOI的Ad-EP300-AS1感染非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)Ad-EP300-AS1以劑量依賴性方式抑制A549和EBC 1細(xì)胞增生。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，腫瘤內(nèi)注射Ad-EP300-AS1抑制A549腫瘤生長(zhǎng)。這些發(fā)現(xiàn)表明EP300-AS1對(duì)非小細(xì)胞肺癌具有治療潛力。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)EP300-AS1以PTBP1依賴性方式降低PRMT5 mRNA穩(wěn)定性，進(jìn)而在體外和體內(nèi)抑制NSCLC細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。

2. 沉默EP300-AS1促進(jìn)A549腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移
為了研究EP300-AS1在體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)中的作用，作者將穩(wěn)定表達(dá)EP300-AS1shRNA的A549細(xì)胞皮下注射到NTG小鼠的右腹，發(fā)現(xiàn)EP300-AS1沉默的A549細(xì)胞形成了更大的腫瘤。此外EP300-AS1敲低增加了PRMT5和Ki67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。生物發(fā)光成像顯示EP300-AS1敲低組的肺部區(qū)域的發(fā)光信號(hào)明顯更高，H&E染色證實(shí)小鼠肺部腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量增加。但PTBP1的敲除能抑制和消除上述結(jié)果，還抑制和消除了EP300-AS1敲低誘導(dǎo)的腫瘤轉(zhuǎn)移。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論
本研究全面闡述了EP300-AS1在NSCLC中的抗腫瘤生物學(xué)功能及其分子機(jī)制。EP300-AS1以PTBP1依賴性方式降低PRMT5 mRNA穩(wěn)定性，在體外和體內(nèi)抑制NSCLC細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。在肺腺癌（LUAD）和肺鱗細(xì)胞癌（LUSC）患者中，EP300-AS1表達(dá)與PRMT5表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)表明EP300-AS1-PTBP1 PRMT5軸是非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)途徑，為非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測(cè)和治療提供了新的調(diào)節(jié)機(jī)制和靶點(diǎn)。