AAV腦立體定位注射小鼠實(shí)驗(yàn)的操作流程

腦定位注射，相比其他注射方式靶向性強(qiáng)，注射病毒體積小，但是侵入性也強(qiáng)，且對(duì)操作者具有很高的要求。在立體定位手術(shù)時(shí)，顱骨上常用的注射參照點(diǎn)是前囟， 也就是中矢狀冠狀縫的交叉點(diǎn)（右下圖 B 中的十字交叉點(diǎn)）。具體操作步驟如下：

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物稱重，進(jìn)行麻醉；

2. 待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物完全麻醉后，用剃毛器將動(dòng)物頭頂眼睛至耳朵之間的毛發(fā)剃除干凈；

3. 將麻醉后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物固定于腦立體定位儀上；

具體操作為：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼部涂抹青霉素眼藥膏以保護(hù)其雙眼；將門齒掛在門齒掛鉤上，確保頭部保持固定；檢查左右耳桿是否在同一水平上，將左右耳桿通過(guò)外耳道插入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物耳內(nèi)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物固定好的標(biāo)準(zhǔn)為：鼻對(duì)正中， 頭部不動(dòng)，提尾不掉，目測(cè)大腦放置水平；

4. 手術(shù)：用碘伏 / 無(wú)色葡萄糖氯己定溶液對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頭皮進(jìn)行消毒清理，用手術(shù)刀沿中間位置剪開頭皮，用鑷子對(duì)表面的結(jié)締組織進(jìn)行清理，暴露實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的顱骨表面；然后進(jìn)行調(diào)平，首先找到前囟這個(gè)坐標(biāo)，并將其歸零， 然后向左右調(diào)平，使左右兩側(cè)處于同一水平，調(diào)整前后囟，使前后囟也在同一水平；

5. 病毒注射：通過(guò)查詢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腦立體定位圖譜確定待注射腦區(qū)的位置（下方圖片是大鼠和小鼠的腦譜），并確定其坐標(biāo)值，即 ML 值（X 軸）、AP 值（Y 軸）、DV 值（Z 軸）；根據(jù)目標(biāo)腦區(qū)設(shè)定好坐標(biāo)，移開注射針，用顱骨鉆開窗(由于顱骨薄,故務(wù)必注意顱骨鉆的力度�。�),操作時(shí)避免傷及腦組織；微量注射器吸取病毒液，隨后固定在定位儀上，根據(jù)設(shè)好的坐標(biāo)進(jìn)行病毒注射，注射速度控制在 0.1-0.15μL/min，注射劑量視具體實(shí)驗(yàn)而定。注射完畢，留針 10min，以便病毒液充分吸收，然后慢慢回針；

6. 縫合頭皮并消毒 , 完成腦定位注射 ; 將動(dòng)物從腦立體定位儀取下 , 回籠待蘇醒 ; 動(dòng)物蘇醒后 , 正常喂養(yǎng) , 病毒注射后 2-4 周可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。

提示：若手術(shù)麻醉時(shí)間較長(zhǎng)，建議不要用酒精消毒，防止酒精揮發(fā)導(dǎo)致動(dòng)物體溫過(guò)低而死亡。手術(shù)過(guò)程和蘇醒過(guò)程注意保暖。

腦立體定位注射示意圖