基于微流控平臺的Abseq技術的原理及在單細胞多組學研究中的優(yōu)勢
蛋白質(zhì)是細胞功能的核心執(zhí)行者，廣泛參與代謝調(diào)控、結構維持、信號轉導等關鍵生命活動。精準解析蛋白質(zhì)的表達水平與修飾狀態(tài)，對揭示細胞真實狀態(tài)與功能機制至關重要。
流式細胞術是傳統(tǒng)單細胞蛋白分析的常用手段，通過熒光標記抗體實現(xiàn)蛋白檢測，但受熒光光譜重疊限制，可檢測靶點數(shù)量有限，難以實現(xiàn)高通量分析，且對低豐度蛋白的檢測靈敏度不足。質(zhì)譜流式雖在檢測通量與靈敏度上有所提升，但存在儀器成本高昂、操作流程復雜、樣本前處理要求嚴苛、無法同步獲取細胞代謝信息等問題，在大規(guī)模單細胞蛋白分析中應用受限。因此，開發(fā)兼具高靈敏度與高通量的單細胞蛋白質(zhì)分析技術已成為迫切需求。
微流控技術的快速發(fā)展為單細胞分析提供了有力支撐，可在微納尺度內(nèi)精準操控細胞與試劑，完成單細胞捕獲、裂解、擴增及檢測等一體化操作，具有高通量、高靈敏度、低試劑消耗等顯著優(yōu)勢�；谖⒘骺仄脚_的 Abseq 技術，成功實現(xiàn)了單細胞水平蛋白質(zhì)的高通量、高靈敏度檢測。
本期為大家分享單細胞多組學研究利器 ——BD AbSeq，可在單一樣本實驗中同時檢測蛋白質(zhì)與 mRNA 表達，助力更深入地理解蛋白質(zhì)生物學功能，高效推進單細胞相關科研進程。
1、技術原理
BD AbSeq 采用寡核苷酸偶聯(lián)抗體（Ab-oligos），通過高通量測序?qū)崿F(xiàn)蛋白表達定量。該技術為每個抗體克隆均偶聯(lián)一段特異性寡核苷酸序列，序列中包含抗體特異性條形碼（ABC），并在其兩端分別設計 3' poly (A) 序列與 5' 通用 PCR 擴增序列。利用二代測序?qū)贵w特異性條形碼（ABC）進行測序解碼，即可實現(xiàn)蛋白豐度的精準檢測。將 BD AbSeq 與單細胞分析系統(tǒng)聯(lián)用，可在同一樣本中同步實現(xiàn) mRNA 與蛋白表達的聯(lián)合檢測。
2、技術優(yōu)勢
（1）多組學分析助力細胞類型鑒定
BD AbSeq 可同步獲取高參數(shù)蛋白質(zhì)表達數(shù)據(jù)與單細胞 RNA-Seq 數(shù)據(jù)，通過補充細胞類型特異性特征信息，顯著優(yōu)化細胞類型聚類效果，助力更精準地分析、表征細胞特性，深入闡明從 mRNA 轉錄到蛋白質(zhì)調(diào)控表達全過程中的核心生物學機制。
如圖所示，對健康個體外周血單核細胞（PBMCs）的分析結果表明：整合 mRNA 與蛋白質(zhì)的多組學數(shù)據(jù)，相比單一 mRNA 數(shù)據(jù)，能更精準地定義細胞類型，實現(xiàn)更清晰的細胞聚類，有效提升細胞分型的準確性與可靠性。
（2）檢測低表達 mRNA 相關蛋白靶點
BD AbSeq 能精準揭示 mRNA 與蛋白表達的非同步關系：
針對 CD4、γδTCR 受體等表達不相關的分子，蛋白數(shù)據(jù)可劃分出更精細的細胞亞群；
對 PD‑1 這類 mRNA 表達量極低、難以被轉錄組檢測的分子，BD AbSeq 可在蛋白水平識別其表達差異，對解析藥物響應機制至關重要。
（3）發(fā)現(xiàn)新的差異表達基因
CD45 基因的不同剪接異構體（CD45RA/CD45RO）無法通過常規(guī) 3’ RNA‑seq 區(qū)分，而 BD AbSeq 可直接識別對應蛋白，精準分群初始 T 細胞（naïve）與記憶 T 細胞（memory）亞群。
這種多組學聯(lián)合分析，有助于在高度異質(zhì)的細胞群中開展全面的基因表達解析與生物標志物挖掘。
這種多組學聯(lián)合分析，有助于在高度異質(zhì)的細胞群中開展全面的基因表達解析與生物標志物挖掘。
（4）觀察免疫細胞早期反應
在免疫細胞激活研究中，BD AbSeq 可同步監(jiān)測早期 RNA 與蛋白的動態(tài)變化，在刺激 4 小時后即可捕捉到多種激活標志物的顯著改變，并可依據(jù)細胞反應模式定義全新細胞亞群，助力新型標志物發(fā)現(xiàn)。
（5）探究基因調(diào)控機制
通過小分子抑制劑分別抑制 PBMC 激活過程中的轉錄、翻譯及蛋白酶體活性，結合 BD AbSeq 與 BD Rhapsody 平臺可發(fā)現(xiàn)：
TNF mRNA 與 CD69 蛋白在不同細胞類型中存在截然不同的調(diào)控模式。
該方案可用于在復雜樣本中，系統(tǒng)解析多種細胞類型的基因表達調(diào)控機制。
3、Ab-seq單細胞蛋白組檢測哪里有？
樂備實提供Ab-seq蛋白組檢測服務，最高可達203種指標：
| 貨號 | 產(chǎn)品名 |
| LXBABH203-1 | AbSeq 203Panel(必須搭配BD WTA) |
樂備實（上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司旗下全資子公司），是國內(nèi)專注于提供高質(zhì)量蛋白檢測以及組學分析服務的實驗服務專家，自2018年成立以來，樂備實不斷尋求突破，公司的服務技術平臺已擴展到單細胞測序、空間多組學、流式檢測、超敏電化學發(fā)光、Luminex多因子檢測、抗體芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫組化、DSP空間多組學等30多個，建立起了一套涵蓋基因、蛋白、細胞以及組織水平實驗的完整檢測體系。
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