蛋白標(biāo)簽的分類、特性、適用實(shí)驗(yàn)及選擇標(biāo)簽的注意事項(xiàng)介紹

蛋白標(biāo)簽（protein tag）是指利用DNA體外重組技術(shù)，與目的蛋白一起融合表達(dá)的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達(dá)、檢測(cè)、示蹤和純化等。應(yīng)用場(chǎng)景主要用于蛋白質(zhì)檢測(cè)如：WB、ELISA、IP等。

根據(jù)不同的“穿搭風(fēng)格”又分為：親和標(biāo)簽，表位標(biāo)簽，熒光標(biāo)簽。

親和標(biāo)簽類
親和標(biāo)簽指在重組蛋白的N端或C端添加的一段短肽，通常包含幾個(gè)到幾百個(gè)氨基酸，主要用于蛋白質(zhì)的純化或提高其溶解度，包括：His、GST、MBP、Strep-tag II、SUMO、Halo等。

寶貝名稱：His
寶貝詳情：0.84kDa（大小）；His-His-His-His-His-His（標(biāo)簽序列）；尺寸最小，通用性強(qiáng)，對(duì)蛋白影響小，能與多種金屬離子發(fā)生特殊的相互作用（優(yōu)點(diǎn)）；特異性低，純化純度低（缺點(diǎn)）；蛋白純化（應(yīng)用）

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寶貝名稱：GST
寶貝詳情：26kDa（大�。�；211種氨基酸（序列）；可增強(qiáng)蛋白可溶性，減少蛋白降解，促進(jìn)表達(dá)（優(yōu)點(diǎn)）；蛋白較大可能影響目標(biāo)蛋白功能（缺點(diǎn)）；蛋白融合表達(dá)和純化，pull-down檢測(cè)（應(yīng)用）

寶貝名稱：MBP
寶貝詳情：40kDa（大小）；大腸桿菌K12的malE基因編碼，包含369個(gè)氨基酸（序列）；增加目標(biāo)蛋白的溶解度和表達(dá)水平（優(yōu)點(diǎn)）；標(biāo)簽非常大對(duì)目標(biāo)蛋白干擾較強(qiáng)，功能研究需通過(guò)酶切去除（缺點(diǎn)）；表達(dá)易形成包涵體的蛋白（應(yīng)用）

寶貝名稱：Strep-tag II
寶貝詳情：1.06kDa（大�。�；WSHPQFEK（序列）；特異性強(qiáng)、洗脫條件溫和、蛋白活性保持良好，適合對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)和功能有高要求的實(shí)驗(yàn)（優(yōu)點(diǎn)）；成本高（缺點(diǎn)）；純化目標(biāo)蛋白表達(dá)量低或背景復(fù)雜的體系（應(yīng)用）

寶貝名稱：SUMO
寶貝詳情：11.2kDa（大�。�；97個(gè)氨基酸（序列）；顯著提高融合蛋白的可溶性和穩(wěn)定性增強(qiáng)表達(dá)（優(yōu)點(diǎn)）；親和純化時(shí)要與其它標(biāo)簽聯(lián)用（缺點(diǎn)）；親和層析純化，提高蛋白產(chǎn)量（應(yīng)用）

寶貝名稱：Halo
寶貝詳情：33kDa；395個(gè)氨基酸（序列）；可以與多種熒光配基或生物素快速形成穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合，熒光強(qiáng)度強(qiáng)，特異性高（優(yōu)點(diǎn)）；標(biāo)簽較大（缺點(diǎn)）；檢測(cè)和親和結(jié)合或固相化固定目的蛋白（應(yīng)用）

表位標(biāo)簽類
表位標(biāo)簽往往是短肽序列，可以通過(guò)特定的抗體與表位結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的精準(zhǔn)定位和檢測(cè)。它們?cè)诿庖叱恋�、WB、免疫熒光和染色質(zhì)免疫沉淀等應(yīng)用中發(fā)揮著重要作用‌。最常用的表位標(biāo)簽有Flag、HA、Myc、V5等。

寶貝名稱：Flag
寶貝詳情：1.01kDa（大�。�；DYKDDDDK（序列）；具有很強(qiáng)的親和力和特異性，可用于快速、高效地檢測(cè)和純化目標(biāo)蛋白（優(yōu)點(diǎn)）；需要高成本的抗Flag親和柱（缺點(diǎn)）；高純度純化和免疫沉淀（應(yīng)用）

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寶貝名稱：HA
寶貝詳情：1.1kDa（大小）；YPYDVPDYA（序列）；對(duì)外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小，抗體普及特異性高（優(yōu)點(diǎn)）；純化應(yīng)用較少（缺點(diǎn)）；Western blot、免疫沉淀、免疫熒光和細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)檢測(cè)（應(yīng)用）

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寶貝名稱：c-Myc
寶貝詳情：1.2kDa（大小）；EQKLISEEDL（序列）；高特異性的抗Myc單克隆抗體，分子量小（優(yōu)點(diǎn)）；需低pH洗脫，影響蛋白活性（缺點(diǎn)）；Western blot、免疫沉淀、免疫熒光和細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)檢測(cè)（應(yīng)用）

寶貝名稱：V5
寶貝詳情：1kDa（大小）；GKPIPNPLLGLDST （序列）；抗體特異性好，分子量小（優(yōu)點(diǎn)）；應(yīng)用范圍小于HA和myc（缺點(diǎn)）；Western blot、免疫沉淀、免疫熒光（應(yīng)用）

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熒光標(biāo)簽類
熒光標(biāo)簽可用于活細(xì)胞和死細(xì)胞檢測(cè)，最常用的熒光蛋白包括綠色熒光蛋白、橙色熒光蛋白、紅色熒光蛋白和黃色熒光蛋白。它們被廣泛用于影像學(xué)研究，如細(xì)胞定位和共表達(dá)實(shí)驗(yàn)。

• 參考往期推文鏈接：
  一文揭秘！綠色熒光蛋白的前世今生
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基因組標(biāo)簽計(jì)劃
中國(guó)科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心基因組標(biāo)簽計(jì)劃（GTP）研發(fā)中心通過(guò)單倍體干細(xì)胞介導(dǎo)的半克隆技術(shù)獲得了數(shù)百種標(biāo)簽小鼠模型。通過(guò)為所感興趣的蛋白賦予標(biāo)簽進(jìn)而通過(guò)識(shí)別標(biāo)簽研究蛋白質(zhì)的行為，研究者們可以高效便捷的確定蛋白質(zhì)的表達(dá)位置和功能互作，追蹤和分析蛋白質(zhì)在小鼠機(jī)體內(nèi)的動(dòng)態(tài)行為。

GTP標(biāo)簽小鼠模型可在蛋白質(zhì)互作，定位等基因功能研究和生物醫(yī)藥研發(fā)中發(fā)揮重要作用。標(biāo)簽小鼠品系為中國(guó)科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心所有，南模生物代為分發(fā)。

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文末溫馨小提示：任何一個(gè)融合標(biāo)簽都不是萬(wàn)能的，沒有哪一個(gè)標(biāo)簽適合所有蛋白的表達(dá)，選擇標(biāo)簽必須考慮蛋白的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)需求。了解融合標(biāo)簽的特性，選擇合適的標(biāo)簽，才能讓重組蛋白表達(dá)事半功倍。

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