慢病毒純化神器——Nereus LentiHERO顛覆性技術

慢病毒載體由于能夠在分裂以及非分裂細胞中穩(wěn)定的整合基因組，因此成為基因以及細胞治療中的一種有效工具。在過去的十幾年中慢病毒的生產(chǎn)以及純化技術已經(jīng)獲得了顯著的進步，然而隨著市場規(guī)模的擴大，對慢病毒純化的通量以及純度的要求日益增長。對于各大企業(yè)來說，構建具有成本效益的生產(chǎn)以及純化平臺具有十分重要的意義。

但是目前慢病毒載體的純化方法和經(jīng)驗多是由抗體藥的純化方法和經(jīng)驗發(fā)展過來的，然而LVV的衣殼直徑較大，在80-100 nm左右，比一般的病毒大得多，它的大小也在純化方面帶來了挑戰(zhàn)，所以標準的基于樹脂的分離方法因LVV太大而不能達到足夠的效果，因此需要純化它們，需要使用不同類型的吸附劑。此外，此外，與AAVs等病毒相比，LVV往往更不穩(wěn)定。LVV包膜在功能方面扮演著重要的角色，包括轉導和嗜性。但這一功能受到各種處理條件的負面影響，如溫度、pH、生物處理過程中液體的離子強度的變化。介于此，Astrea Bioseparations 的科學家，基于自身的純化和產(chǎn)品開發(fā)經(jīng)驗，開發(fā)了專門針對病毒純化的Nereus 系列產(chǎn)品，目前最先推出的是針對慢病毒純化的LentiHERO.

下面就跟大家隆重介紹一下我們的這款慢病毒純化的產(chǎn)品--LentiHERO
Nereus LentiHERO™主要基于AstreAdept™基架和離子交換原理。

1.什么是AstreAdept™？
AstreAdept™是一種新型納米纖維材料，不同于傳統(tǒng)凝膠介質(zhì)，它能通過快速的對流模式迅速捕獲大量的目的蛋白，使得工藝運行流速不再受限于凝膠孔徑大小。Astrea將這項技術整合到離心柱中，以將這些優(yōu)勢帶到實驗室規(guī)模的病毒載體純化中。

2.Nereus LentiHERO™，5步離心快速慢病毒純化

無需昂貴設備，簡單幾步即可實現(xiàn)慢病毒的純化，配合真空設備，可實現(xiàn)多個樣品的同步處理。讓純化像DNA提取一樣簡單。

3.高動態(tài)結合載量
15%穿透時，每根離心柱的動態(tài)結合載量為1.9E+10

Nereus LentiHERO™小柱以20 mv/min的速度上樣，流穿收集在10mL液體中，使用p24 ELISA分析，基于上樣的總VP，計算VP穿透百分比

4.高回收率，無血清培養(yǎng)體系大于60%

有無血清培養(yǎng)體系慢病毒回收率：純化后樣品中慢病毒/病毒原液%。血清(-) n=3，血清(+)n=2

5.高效去除宿主蛋白殘留
減少95%的宿主細胞蛋白污染物
通過SDS-PAGE，洗脫液中檢測不到宿主細胞蛋白
宿主細胞蛋白大大減少，無論進樣中是否存在血清

6.功能、形態(tài)不受影響
重要蛋白，如Gag、編碼衣殼、基質(zhì)和核衣殼的大小不受影響
用Nereus LentiHERO™純化的洗脫慢病毒的顆粒大小和形態(tài)不受影響
純化慢病毒顆粒的感染性不受影響

Western blot分析使用兔多克隆抗p24 IgG檢測LV特異性p24 Gag蛋白。LV洗脫物的兩個重復分析如泳道 1和 2所示。gag蛋白，如p24，在24 kDa左右被發(fā)現(xiàn)，另一個主要的gag蛋白p55在55 kDa左右。這種結果與截留分子量 (100kDa) 過濾法濃縮的LV相同 (數(shù)據(jù)未顯示)。

和同類產(chǎn)品比較在純度，得率和純化速率上面均有較大的優(yōu)勢


Nereus LentiHERO™ 性能總結
① 基于新型納米復合纖維膜技術 - AstreAdept™ —— 賦能
② 易于使用的設計，實現(xiàn)功能性慢病毒顆粒的快速純化和高回收率
③ 宿主細胞蛋白質(zhì)殘留去除95%以上
④ 同時處理多個樣品，降低病毒載體開發(fā)樣品制備的瓶頸
⑤ 實現(xiàn)10以上倍體積濃縮

通過助力研究人員加速細胞和基因療法的開發(fā)，該技術提供了一種更具成本和時間效益的方式，以加快向有需要的患者提供創(chuàng)新療法。

實驗室研發(fā)離心柱產(chǎn)品Nereus LentiHERO™已于9月29號美國BPI會議期間上市。研發(fā)設備配套AstreaAdept™技術解決基因和細胞治療領域工藝開發(fā)，小試以及生產(chǎn)規(guī)模的技術瓶頸。生產(chǎn)規(guī)模產(chǎn)品預計在2023年推出。