RNA比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

YIJI RNA比色法定量檢測試劑是一種旨在通過對溴苯肼與RNA的特異性結合反應，借助可見光波長的吸光峰值的變化，比色測定樣品中RNA的絕對含量或濃度的技術方法。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織RNA以及環(huán)境中RNA含量分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，簡易方便，無需樣品純化，定量準確。

技術背景

對溴苯肼（p-bromophenylhydrazine；PBPH）具有與RNA酸性水解去嘌呤化（depurinated）的磷酸核糖（ribosephosphate），再去磷酸和脫水產(chǎn)生的糠醛（furfural），通過酸化溶劑萃取后，進行特異性反應，形成穩(wěn)定、可重復性的黃色復合物。同時有效限制了與DNA釋放的脫氧核糖 （deoxyribose），以及樣本中糖原、甲基糖苷（methyl glucoside）、果糖（levulose）、葡萄糖（dextrose）等單糖分子發(fā)生反應產(chǎn)生的干擾。對溴苯肼方法較之苔黑酚（orcinol）反應更為特異。通過可見光（450nm）吸收進行定量分析RNA。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI水解液（Reagent A） 毫升

YIJI酸化液（Reagent B） 毫升

YIJI萃取液（Reagent C）      毫升

YIJI反應液（Reagent D）      毫升

YIJI穩(wěn)定液（Reagent E）      毫升

YIJI標準液（Reagent F）        毫升

產(chǎn)品說明書                    1份

保存方式

保存YIJI標準液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；試劑具有強力腐蝕性，注意操作安全，且避免光照，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

干式恒溫儀或電熱爐：用于反應物孵育

臺式離心機：用于樣品操作

3毫升玻璃比色皿：用于比色分析的容器

分光光度儀：用于樣品比色測定

實驗步驟

• 測定準備
• 準備好待測樣品，置于冰槽里
• 設定好分光光度儀：波長450nm，并置零
• 準備好6個1.5毫升離心管，標記為1至6號管
• 按照下表配制標準液
• 放進冰槽里備用，避免光照

二、比色測定

• 準備至少7個新的15毫升錐形離心管作為測定管：標記6個標準管和1個待測樣品管
• 分別加入xx微升上述配制的YIJI標準液（Reagent F）到相應標準測定管里（注意：濃度和管號對號入座）
• 加入500微升待測樣品到樣品測定管里
• 分別加入xx微升YIJI水解液（Reagent A），混勻
• 煮沸30分鐘或放進100℃干式恒溫儀孵育60分鐘（注意：小心加熱過程中蓋子打開）
• 在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
• 分別加入xx毫升YIJI酸化液（Reagent B）到所有測定管里
• 分別加入xx毫升YIJI萃取液（Reagent C）
• 煮沸60分鐘或放進100℃干式恒溫儀孵育3小時（注意：小心加熱過程中蓋子打開）
• 在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
• 分別加入xx毫升YIJI萃取液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為10000g
• 小心移取1毫升上層液相液體到新的15毫升錐形離心管
• 加入xx毫升YIJI反應液（Reagent D），混勻
• 室溫下孵育1小時，避免光照
• 加入xx毫升YIJI穩(wěn)定液（Reagent E），混勻
• 轉移到3毫升玻璃比色皿
• 放進分光光度儀讀數(shù)：獲得吸光讀數(shù)
• 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光單位（OD）；橫座標（X軸）為標準RNA含量（微克）
• 根據(jù)標準曲線獲得樣品對應RNA濃度（微克）
• 樣品實際RNA濃度：

注意事項

• 本產(chǎn)品為10次樣本操作
• 本產(chǎn)品檢測范圍在9至150微克
• 操作時，須戴手套
• 系統(tǒng)操作時，標準樣品測定只需1次
• 試劑具有腐蝕性，嚴格注意操作安全
• 待測樣品無需純化，包括去蛋白、去糖、去DNA等處理
• 計算實際濃度時，不要忘記待測樣品的稀釋倍數(shù)
• 使用無水乙醇清洗比色皿
• 本公司提供系列生物大分子定量分析試劑產(chǎn)品

質量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定定量準確