小鼠流式實驗入門必看：這些特有標志抗體你用對了嗎？

在小鼠相關(guān)細胞的流式研究中，我們經(jīng)常發(fā)現(xiàn)一些小鼠細胞采用了不同于人源細胞的標志物抗體。為什么同樣類型的細胞，人源和小鼠源會采用不同的標志物？甚至不同品系小鼠相同類型的細胞，都會采用不同的標志物？接下來我們了解下都有哪些常見的小鼠特有標志物，為什么要用這些標志物。
 

01 B細胞

人源標志物：CD19、CD20

小鼠源標志物：CD19、B220 (CD45R)

這是最經(jīng)典的例子。在B細胞檢測中，人B細胞的核心是CD19和CD20，而人源細胞也不表達B220 (CD45R)；在小鼠中，情況卻有所不同，雖然CD19依舊重要，但小鼠CD20僅在B細胞發(fā)育的較晚階段（從前B細胞晚期開始）才開始表達，這意味著它無法標記早期的B祖細胞，會遺漏一部分B細胞群體，同時小鼠幾乎所有B細胞都高表達B220（CD45的一種剪接變體）故而成為小鼠B細胞最佳檢測標志物。

（小鼠細胞采用B220+確認B細胞，CD20+確認B細胞發(fā)育的較晚階段）

02 NK細胞

人源標志物：CD56 (NCAM)

小鼠源標志物：NK1.1 (NKR-P1C) /NKp46 (NCR1)/ CD49b (DX5)

NK細胞檢測時，人源和小鼠源的定義性標志有顯著不同。人NK細胞根據(jù)CD56表達密度分亞群（CD56bright/CD56dim），是人NK細胞分型的核心標志物。小鼠無CD56同源物作為標志，常用NK1.1(NKR-P1C，僅限 C57BL/6 等部分品系，BALB/c等品系缺失)、NKp46 (NCR1、CD335，所有品系小鼠以及人類中都保守的)，或更通用的CD49b (DX5，幾乎所有品系成熟NK細胞都表達，但也表達于某些活化T細胞、嗜堿性粒細胞等，同時不標記組織駐留NK細胞（如肝NK）)。

（小鼠NK細胞檢測采用NK1.1+ NKp46(CD335)+）

03 巨噬細胞

人源標志物：CD68

小鼠源標志物：F4/80、CD68

F4/80 是小鼠組織駐留巨噬細胞的標志性分子，在所有經(jīng)典的組織駐留巨噬細胞上極高表達（如腹腔巨噬細胞、肝臟Kupffer細胞、小膠質(zhì)細胞、肺泡巨噬細胞等），F(xiàn)4/80與CD11b 結(jié)合 (CD11b+ F4/80hi)是鑒定和分選組織巨噬細胞的金標準。人源細胞缺少F4/80表達，因此巨噬細胞通常使用CD68標記巨噬細胞，小鼠巨噬細胞亦可采用CD68標記。

（小鼠巨噬細胞檢測采用F4/80+ CD11b+區(qū)分其他單核細胞）

04 其他類型

除以上類型的細胞外，還有其他類型細胞，在人源和小鼠源檢測流式標志物時有差異，例如：
漿細胞樣樹突狀細胞：小鼠源通常檢測B220 (CD45R)、Siglec-H、PDCA-1 (BST2)，人源通常檢測CD123 (IL-3Rα)、CD303 (BDCA-2)、CD304 (BDCA-4)；

中性粒細胞：小鼠源通常檢測Ly-6G，人源通常檢測CD15 (Lewis X)、CD16 (FcγRIII)；

活化/記憶T細胞亞群 ：小鼠源通常檢測CD62L 和 CD44，人源通常檢測CD45RA 和 CD45RO；

因此，在檢測細胞流式標志物時，必須摒棄簡單的“名稱對應”思維，轉(zhuǎn)而采用 “功能/細胞類型對應” 的思維，必須要查閱文獻了解清楚物種背景，選擇合適的標志物，尤其是在跨種屬對比檢測時，一定要選擇在兩者上都表達且功能保守的分子作為參照。

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