在一細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)多基因共表達(dá)的方法策略

瀏覽次數(shù)：588　發(fā)布日期：2025-12-16　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

當(dāng)細(xì)胞中需要表達(dá)多個(gè)基因時(shí)，可以選擇使用雙順?lè)醋踊蚨囗樂(lè)醋颖磉_(dá)載體。在構(gòu)建雙順?lè)醋踊蚨囗樂(lè)醋?載體的各種策略中，來(lái)源于腦心肌炎病毒 EMCV 的內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn) (internal ribosome entry site， IRES) 或來(lái)源于口蹄疫病毒 FMCV 的自剪切多肽 2A(self-cleaving 2A peptide，2A) 被廣泛應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了在單個(gè)載體上同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因的目的。

◆內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn) IRES
IRES 能夠在一些反式作用因子的輔助下，招募核糖體小亞基到 mRNA 的翻譯起始位點(diǎn)，使蛋白質(zhì)翻譯起始不依賴于 5′帽結(jié)構(gòu)，從而使核糖體直接從 mRNA 中間起始翻譯成為可能，即允許在同一啟動(dòng)子的控制下共同表達(dá)多個(gè)基因。絕大多數(shù)細(xì)胞 IRES 元件位于起始密碼子上游的 5′ UTR 內(nèi)。然而，在有些情況下， IRES 位于起始密碼子的下游或位于編碼區(qū)，從而觸發(fā)截短蛋白的合成。攜帶有 IRES 元件的雙順?lè)醋踊蚨?順?lè)醋?rAAV 載體可用于由同一啟動(dòng)子控制的多個(gè)基因的共同表達(dá)。需要強(qiáng)調(diào)的是，IRES 下游基因的有效表達(dá)依賴于特定的 IRES 序列，因此，保證 IRES 基因序列的完整性對(duì)于其高效活性至關(guān)重要。
IRES 的優(yōu)點(diǎn)：確保了 IRES 上下游基因的共表達(dá)；在 IRES 下游加入亞細(xì)胞定位等序列的可行性；

◆自剪切多肽 2A
自剪切多肽 2A 于 1991 年在口蹄疫病毒（FMDV）中被發(fā)現(xiàn)，平均長(zhǎng)度為 18-22 個(gè)氨基酸，位于小核糖核酸病毒家族成員的兩種蛋白質(zhì)之間。目前，主要有 4 種常用的 2A 肽，分別來(lái)源于口蹄疫病毒 2A(F2A)、1 型豬捷申病毒 2A (P2A)、明脈扁刺蛾病毒 2A (T2A)、馬甲型鼻炎病毒 2A (E2A)，序列如下：
F2A:VKQTLNFDLLKLAGCVESNPG
P2A:GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
T2A: EGRGSLLTCGDVEENPG
E2A:QCTNYALLKLAGDVESNPG
2A 肽的優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)小，緩解了載體裝載量的壓力，也為聯(lián)合應(yīng)用多種工具構(gòu)建三個(gè)及以上順?lè)醋犹峁┝?可能；上下游蛋白表達(dá)均衡；基于 2A 肽的雙順?lè)醋虞d體比基于 IRES 的載體更有效。

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