DNP-BSA蛋白在免疫層析檢測中的作用優(yōu)勢及應(yīng)用

DNP-BSA（2,4-二硝基苯偶聯(lián)牛血清白蛋白，AbMole，M58157）是一種半抗原-載體蛋白復(fù)合物，它是由小分子DNP與大分子BSA兩個組分連接后形成的。DNP-BSA和抗DNP抗體可在免疫層析技術(shù)中構(gòu)建出獨(dú)立、穩(wěn)定的質(zhì)控系統(tǒng)，成為測試結(jié)果可靠性的關(guān)鍵元件。AbMole為全球科研客戶提供高純度、高生物活性的抑制劑、細(xì)胞因子、人源單抗、天然產(chǎn)物、熒光染料、多肽、化合物庫、抗生素等科研試劑，全球大量文獻(xiàn)專利引用。

在免疫層析試紙條上，質(zhì)控線（C線）是判斷檢測有效性的"生命線"。無論樣本中是否含有目標(biāo)物質(zhì)，C線必須顯色才能確認(rèn)檢測過程的準(zhǔn)確性：即確認(rèn)液體樣本已通過毛細(xì)管的作用實(shí)現(xiàn)遷移且整個反應(yīng)體系功能正常。C線的必要性體現(xiàn)在三個層面：過程驗(yàn)證（確認(rèn)層析系統(tǒng)正常工作）、試劑質(zhì)控（驗(yàn)證標(biāo)記物和膜材料性能）、操作驗(yàn)證（排除加樣量不足或?qū)游鲋袛嗟纫蛩兀�。尤其在生產(chǎn)儲存環(huán)節(jié)，C線能直觀反映試紙?jiān)谶\(yùn)輸、高溫或潮濕環(huán)境下是否失效^[1]。傳統(tǒng)質(zhì)控系統(tǒng)主要依賴動物源性抗體，最常見的是羊抗鼠IgG系統(tǒng)，即在結(jié)合墊中標(biāo)記鼠源抗體，C線包被羊抗鼠抗體，通過種屬間抗體反應(yīng)實(shí)現(xiàn)質(zhì)控檢測^[2]。這種方法存在難以克服的缺陷：首先是樣本干擾風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)闃颖局锌赡芎�有一定比例的抗動物抗體（HAAA），它們會與C線抗體非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽性顯色。其次是穩(wěn)定性問題，動物抗體在常溫下儲存會出現(xiàn)活性下降的趨勢。此外，還可能會出現(xiàn)交叉反應(yīng)性，如羊抗鼠抗體可能與樣本中的大鼠IgG發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾質(zhì)控判斷^[3]。其他傳統(tǒng)方案如雞IgY/羊抗雞IgY系統(tǒng)，雖能降低HAAA效應(yīng)，但生產(chǎn)周期長，且抗體效價存在波動，導(dǎo)致批間差異較大。DNP（2,4-二硝基苯酚）是一種人工合成的小分子化合物，在動植物體內(nèi)是不存在的。選擇DNP-BSA作為質(zhì)控系統(tǒng)具有以下顯著優(yōu)勢：首先，DNP作為一種人工合成的半抗原，在生物體內(nèi)不存在天然對應(yīng)物，可有效避免內(nèi)源性物質(zhì)的干擾；其次，DNP-BSA與抗DNP抗體的結(jié)合親和力高，反應(yīng)特異性強(qiáng)，因此質(zhì)控信號具有更好的穩(wěn)定性和可靠性；最后，DNP-BSA復(fù)合物具有良好的熱穩(wěn)定性，且批次間差異較小。DNP-BSA質(zhì)控系統(tǒng)目前已經(jīng)可兼容膠體金、熒光微球、量子點(diǎn)等各類標(biāo)記技術(shù)^[4]。這種普適性使其已被廣泛應(yīng)用于抗原檢測、病毒篩查等領(lǐng)域的免疫層析試紙的開發(fā)。

免疫層析技術(shù)的原理^[1]

參考文獻(xiàn)及鳴謝
[1] A. Agrawal, R. Varshney, A. Gattani, et al., Gold nanoparticle based immunochromatographic biosensor for rapid diagnosis of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis infection using recombinant protein, Journal of microbiological methods 177 (2020) 106024.
[2] Michael G J Fresenius' journal of analytical chemistry Weller, Immunochromatographic techniques–a critical review, 366(6) (2000) 635-645.
[3] M Hagen, GH J Journal of immunological methods Strejan, Antigen leakage from immunosorbents: Implications for the detection of site-directed auto-anti-idiotypic antibodies, 100(1-2) (1987) 47-57.
[4] Hidenobu Aizawa, Mitsuhiro Tozuka, Shigeru Kurosawa, et al., Surface plasmon resonance-based trace detection of small molecules by competitive and signal enhancement immunoreaction, 591(2) (2007) 191-194.