大小鼠中Sa,Kp,Pp 3種常見病原菌的檢測(cè)

三種常見病原菌
肺炎克雷伯菌是革蘭氏陰性桿菌，常成對(duì)或短鏈狀排列，具有肥厚莢膜，通常無(wú)鞭毛，無(wú)動(dòng)力，但有菌毛，目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò)80種不同的K抗原血清型和O抗原血清型。肺炎克雷伯菌可通過(guò)腹腔、呼吸道等途徑感染小鼠，導(dǎo)致敗血癥和多器官衰竭。毒力因子包括：莢膜多糖、脂多糖、菌毛、外膜蛋白、毒素（部分高毒力株可能產(chǎn)生如腸毒素、細(xì)胞毒素）。

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），分布于自然界（土壤、空氣、水）以及人類和動(dòng)物皮膚、鼻腔、黏膜上，是革蘭氏陽(yáng)性球菌。顯微鏡下常呈現(xiàn)葡萄串狀排列，在培養(yǎng)基上可形成金黃色菌落。

嗜肺巴氏桿菌菌體多呈球狀或短棒狀單體排列，美蘭染色可見典型兩極著色現(xiàn)象。細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)經(jīng)革蘭氏染色驗(yàn)證為陰性，掃描電鏡觀察顯示其表面具有莢膜結(jié)構(gòu)。嗜肺巴氏桿菌是布魯桿菌科巴斯德氏菌屬微生物，廣泛存在于嚙齒類動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，該菌種具有條件致病性，可引發(fā)免疫缺陷動(dòng)物模型感染并造成嚴(yán)重后果。

新修訂的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》（GB 14922—2022）中，把無(wú)特定病原體（specific pathogen-free，SPF）級(jí)小鼠、大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、兔的金黃色葡萄球菌列為必要時(shí)檢測(cè)項(xiàng)。在此前的國(guó)標(biāo)中，金黃色葡萄球菌更是被列為必須檢測(cè)項(xiàng)目。而肺炎克雷伯菌、嗜肺巴氏桿菌是SPF級(jí)大小鼠必須排除的病原體。

常見病原菌的檢測(cè)
這三種菌在清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中檢出率較高。需要一種快捷的檢測(cè)方案實(shí)現(xiàn)三種菌的檢測(cè)，并且檢測(cè)準(zhǔn)確度高，靈敏度高。

病原菌的檢測(cè)通常依賴培養(yǎng)法的檢測(cè)，通過(guò)幾天的培養(yǎng)后觀察病原菌的形態(tài)、染色等生化反應(yīng)，判斷菌的種類，這種檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)要求比較高，培養(yǎng)時(shí)間比較長(zhǎng)，遇到大量的檢測(cè)任務(wù)時(shí)比較耗費(fèi)時(shí)間和人力成本。

當(dāng)前檢測(cè)病原菌的一種有效的手段是qPCR的檢測(cè)方案。qPCR是對(duì)病原體核酸的指數(shù)級(jí)別的擴(kuò)增，可放大檢測(cè)信號(hào)，同時(shí)通過(guò)設(shè)計(jì)特異性的針對(duì)病原菌的引物來(lái)提升檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

翼和生物Biowing®SPF級(jí)大小鼠常見病原菌qPCR檢測(cè)試劑盒，采用高靈敏度和特異性的探針?lè)╭PCR技術(shù)，專為在多種樣本類型中快速、高靈敏地篩查SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室大小鼠常見的6種病原菌而設(shè)計(jì)。

本試劑盒采用Taqman熒光定量PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)了3套引物探針，設(shè)置兩管qPCR體系，分別在FAM（金黃色葡萄球菌Sa），HEX（嗜肺巴斯德桿菌Pp），ROX（肺炎克雷伯菌Kp）三個(gè)通道檢測(cè)3種病原菌。該試劑盒具有以下特點(diǎn)：靈敏：檢測(cè)靈敏度較高，10 CFU可被有效檢出。穩(wěn)定：全程閉管操作，無(wú)交叉污染�？煽浚汉瑑�(nèi)參對(duì)照，避免假陰性。方便：操作簡(jiǎn)單，一步法檢測(cè)。

由于PCR反應(yīng)非常靈敏，實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)注意，以免發(fā)生核酸污染。