Pipetty電動(dòng)移液器在犬細(xì)小病毒檢測(cè)（HA實(shí)驗(yàn)）中的應(yīng)用

方案摘要：本方案旨在通過血凝試驗(yàn)（HA）定性檢測(cè)犬細(xì)小病毒（CPV）、定量測(cè)定病毒血凝效價(jià)，為臨床診斷與病毒研究提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、成本低、3-4 小時(shí)出結(jié)果，可用于 CPV 臨床初篩、病毒載量評(píng)估及疫苗質(zhì)控，但需注意其特異性與靈敏度有限，需結(jié)合 PCR、臨床癥狀等互補(bǔ)驗(yàn)證，避免假陽 / 假陰性誤判。為提升實(shí)驗(yàn)效率，實(shí)驗(yàn)采用了Pipetty電動(dòng)移液器，這款移液器擁有輕便小巧的特點(diǎn)，重量?jī)H 75g，操作起來十分舒適。同時(shí)，它具備高精度的等量連續(xù)分液能力，能夠按照設(shè)定的移液量進(jìn)行多次重復(fù)排液，并且配備了溫度控制功能，可避免因手部熱量影響而導(dǎo)致的精度降低。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
      犬細(xì)小病毒 HA 實(shí)驗(yàn)核心基于犬細(xì)小病毒（CPV，尤其 CPV-2 型及變異株）的血凝特性。CPV 衣殼表面含血凝素蛋白，該蛋白可特異性結(jié)合豬或恒河猴紅細(xì)胞表面的對(duì)應(yīng)受體，引發(fā)紅細(xì)胞凝集反應(yīng) —— 即紅細(xì)胞不再均勻懸浮，聚集成團(tuán)并鋪展；若樣本無 CPV 或病毒量極低，紅細(xì)胞則因重力沉淀為規(guī)則小圓點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)通過梯度稀釋待檢樣本，加入新鮮紅細(xì)胞懸液孵育后，觀察紅細(xì)胞狀態(tài)：凝集為陽性（提示含 CPV），沉淀為陰性。同時(shí)，以能引起完全凝集的樣本最高稀釋倍數(shù)作為血凝效價(jià)，間接反映樣本中 CPV 的載量，為后續(xù)定性判斷與定量評(píng)估提供依據(jù)。
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動(dòng)移液器MSIC01-02-1000及配套吸頭；
② 冰箱（4 ℃、20 ℃、-70 ℃）；
③ 恒溫培養(yǎng)箱（5℃~100℃）；
④ 微型混合器；
⑤ 96孔V形微量反應(yīng)板。
 
2、試劑和材料
① PBS；
② 1%豬紅細(xì)胞懸液；
③ CPV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、使用Pipetty電動(dòng)移液器連續(xù)分液功能，設(shè)置單次分液量為25μL，分液次數(shù)12次，在96孔V形微量反應(yīng)板上，第1孔~第12孔中分別加入25μL PBS。
 
2、設(shè)置單次移液模式，取處理好的待檢樣品25μL加入左側(cè)第1孔，按UP鍵，進(jìn)入混勻模式，混合均勻后，吸出25μL至第2孔，混合均勻后，吸出25μL至第3孔，依次倍比稀釋，至第11孔，混合均勻后，吸出25μL棄掉，第12孔作為PBS 對(duì)照孔。
3、設(shè)置連續(xù)分液模式，每孔加 25 μLPBS。
4、由左至右依次向每孔加入25μL 1%豬紅細(xì)胞懸液，置于微型混合器上振蕩10s，使紅細(xì)胞與待檢樣品充分混合，在4℃條件下靜置30min~60min，待PBS對(duì)照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)可觀察結(jié)果。
四、結(jié)果判定
將96孔V形微量反應(yīng)板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無淚珠狀流淌。以使紅細(xì)胞100%凝集（完全無淚珠狀流淌）的最高稀釋倍數(shù)作為該病毒的血凝效價(jià)，即一個(gè)血凝單位，判定待檢樣品的病毒血凝效價(jià)。