抗體(Ab)保存和稀釋的注意事項
瀏覽次數:272 發(fā)布日期:2025-6-26
來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
抗體(antibody,Ab)是機體在體內存在的外來分子、微生物等抗原物質刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。
抗體的保存和稀釋需要特別注意以下幾個方面:
一、保存注意事項:
1. 溫度控制:
短期保存(12周內使用):推薦在4℃避光保存,避免反復凍融。
長期保存:對于大多數抗體,分裝后保存在20℃或80℃。20℃通常足夠,除非說明書特別建議80℃。
1. 特定類型抗體:
- HRP標記抗體:加50%甘油后于20℃保存,HRP底物需4℃避光保存。5
- 酶聯抗體:4℃保存,避免凍融。
- 流式抗體(熒光素標記):4℃避光保存,不加甘油。
- IgG3同型對照:4℃保存,避免凍融。
2. 分裝:
將抗體分裝成適合一次實驗用量的小份,避免反復凍融。
分裝體積不宜過小,至少10ul以上,以減少蒸發(fā)和管壁吸附的影響。
復融后的抗體一次用不完,應保存在4℃,避免再凍。
3. 避光和防污染:
對于光敏感的抗體,如熒光素標記抗體,應使用棕色管或錫箔紙避光保存。
可加入疊氮鈉(0.02% w/v)作為防腐劑,但注意其毒性,避免用于活細胞或體內實驗。
4. 運輸條件:
一般運輸在4℃進行,避免干冰運輸,因為干冰運輸后需解凍,增加一次凍融過程。
收到后應立即按說明書要求保存。
5. 使用專用稀釋液:
有些抗體可能推薦使用特定的稀釋液,如不含BSA和有毒防腐劑的即用型抗體稀釋液。
二、稀釋注意事項:
1. 選擇合適的稀釋液:
無動物來源蛋白,不含疊氮鈉等有毒防腐劑,如李記的通用型抗體稀釋液。
2. 計算工作濃度:
根據實驗需求準確計算所需抗體體積和稀釋液體積。
3. 操作規(guī)范:
稀釋后立即充分混勻,靜置在4℃冰箱保存。
使用后的工作液可在4℃保存46個月,但需注意反應強度變化。
4. 重復使用:
可回收稀釋后的抗體工作液,但要監(jiān)測反應強度,必要時補充原液。
5. 注意背景和特異性:
含有免疫增強劑和穩(wěn)定劑的稀釋液可能提供更干凈的背景。
遵循這些注意事項,可以有效延長抗體的活性和使用效率,確保實驗結果的準確性和可靠性。