抗體驗證的概念及其驗證的工作流程簡介

抗體是生命科學(xué)研究、診斷和測試中常用的試劑之一。盡管它們被廣泛使用但目前還沒有標(biāo)準(zhǔn)指南來定義它們在使用前應(yīng)如何進(jìn)行驗證。結(jié)果是許多商業(yè)抗體沒有得到充分驗證和/或無法獲得實驗數(shù)據(jù)。 未驗證的抗體驗證導(dǎo)致了不可重復(fù)的結(jié)果，甚至項目被放棄，造成時間、金錢和樣品的巨大損失 。因此，迫切需要驗證抗體并為其創(chuàng)建通用標(biāo)準(zhǔn)。

什么是抗體驗證？

抗體驗證定義為以下幾點：證明特異性（抗體區(qū)分不同抗原的能力），證明在將要使用的應(yīng)用中的特異性，證明親和力（抗體與表位結(jié)合的強度） ) 并最終證明可重復(fù)性。然而，雖然抗體驗證的這種定義是實用的，但其廣泛應(yīng)用或標(biāo)準(zhǔn)化過程的實施仍然是一個重要的關(guān)注領(lǐng)域。

一些抗體銷售公司驗證了他們的產(chǎn)品，而其他公司根本不驗證它們。之所以出現(xiàn)這些差異，是因為與藥物不同，沒有機構(gòu)管理可以出售的物品。但隨著市場的快速增長，質(zhì)量聲譽正在成為一些供應(yīng)商商業(yè)計劃的一部分，抗體驗證現(xiàn)在被視為一種競爭優(yōu)勢。

驗證抗體的責(zé)任在于供應(yīng)商本身，無論他們是制造該抗體還是簡單地分銷它。但是，雖然供應(yīng)商對其銷售的試劑質(zhì)量負(fù)責(zé)，但抗體性能可能會因超出其驗證工作范圍的原因而有所不同 。例如，抗體在運輸過程中可能會發(fā)生變化，或者雖然驗證可以在具有適當(dāng)控制的生物相關(guān)系統(tǒng)中完成，但最終用戶很可能會在他們自己的系統(tǒng)中使用它。因此，最終用戶也有責(zé)任驗證他們的抗體。不同的制造商已經(jīng)提出了驗證過程。

通過采取幾個小步驟，研究人員可以在運行實驗時降低風(fēng)險，而無需對他們獲得的抗體進(jìn)行批判性思考。
 
抗體的驗證工作流程

抗體的驗證工作流程如下：

1.識別針對感興趣蛋白質(zhì)的所有商業(yè)抗體；
2.使用 PaxDB 來識別以相對高水平表達(dá)感興趣蛋白質(zhì)的細(xì)胞系并且很容易被 CRISPR/Cas9 修改；
3.生成 KO 細(xì)胞系并通過定量免疫印跡篩選抗體；
4.使用步驟 3 中確定的特異性抗體來篩選細(xì)胞系面板；
5.根據(jù)步驟 4 中的信息選擇目標(biāo)蛋白高表達(dá)的細(xì)胞系，可通過 CRISPR/Cas9 進(jìn)行編輯，并具有目標(biāo)目標(biāo)的適當(dāng)特征；
6. 使用選定的編輯線通過免疫沉淀和免疫熒光篩選特異性抗體；