活細胞掃描分析儀動態(tài)追蹤細胞遷移助力細胞劃痕實驗

瀏覽次數(shù)：59　發(fā)布日期：2026-3-17　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負

細胞劃痕實驗是解析細胞遷移的常規(guī)實驗，常見于腫瘤學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。其核心實驗邏輯為：在融合生長的細胞單層上用移液槍頭劃一道均勻的“劃痕”（模擬體內(nèi)組織損傷的“傷口”），洗去劃落的細胞后繼續(xù)培養(yǎng)，通過不同時間點觀察劃痕區(qū)域的細胞遷移、填充情況，量化細胞的運動能力。

細胞劃痕實驗的工作流程：

01實驗準備
（溫馨提醒：提前1-2天完成，避免操作倉促）
1. 細胞準備：復(fù)蘇目標貼壁細胞，傳代培養(yǎng)至對數(shù)生長期（細胞活性 80%-90%，遷移能力最強，避免老化細胞）；
2. 耗材試劑：6 孔板 / 12 孔板（最常用，劃痕視野適中）、無菌 10μL/200μL 移液槍頭（統(tǒng)一規(guī)格，保證劃痕寬度一致）、無血清培養(yǎng)基 / 低血清培養(yǎng)基（抑制細胞增殖，聚焦純遷移；若需研究 “增殖 + 遷移”，用常規(guī)完全培養(yǎng)基）、PBS 緩沖液、明美活細胞掃描分析儀MCS31
3. 耗材預(yù)處理：孔板可提前做標記（在板底背面劃橫線，等距分布，方便后續(xù)定位同一劃痕區(qū)域拍照）。

02鋪板培養(yǎng)
（核心前提：形成致密細胞單層，單層無間隙）
1. 取對數(shù)生長期細胞，胰酶消化后用完全培養(yǎng)基重懸，計數(shù)并調(diào)整細胞濃度（如 6 孔板約 5×10⁵個 / 孔，12 孔板約 2×10⁵個 / 孔，根據(jù)細胞大小微調(diào)）；
2. 按定濃度將細胞懸液加入標記好的孔板，輕輕晃動使細胞均勻分布，避免局部堆積；
3. 置于 37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，直至細胞形成100% 融合的致密單層（單層無空隙，否則會干擾劃痕愈合結(jié)果判斷）。

03畫制劃痕
（核心關(guān)鍵：劃痕均勻，無偏移、細胞殘留）
1. 取出培養(yǎng)板，超凈臺內(nèi)操作，用無菌移液槍頭（同一規(guī)格），沿板底提前劃好的橫線垂直勻速劃過細胞單層（可用孔板蓋子作為劃線工具，避免斜劃）；
2. 劃完后輕提槍頭，避免刮擦孔底導(dǎo)致細胞層脫落，肉眼觀察劃痕為清晰、連續(xù)的空白線條即可。

04清洗細胞
（去除劃落的細胞碎片，避免碎片干擾愈合）
1. 劃痕后，孔內(nèi)會有大量劃落的細胞和碎片，用無菌 PBS 緩沖液輕輕潤洗細胞層2-3 次；
2. 潤洗時緩慢滴加 PBS，沿孔壁流下，避免直沖劃痕區(qū)域?qū)е录毎撀�，最終洗去所有懸浮的細胞和碎片，使劃痕區(qū)域無殘留。

05加液培養(yǎng)
（定時放置培養(yǎng)，根據(jù)實驗?zāi)康倪x培養(yǎng)基）
1. 按實驗?zāi)康募尤雽?yīng)培養(yǎng)基：研究純細胞遷移：加入無血清 / 低血清培養(yǎng)基（血清含生長因子，會促進細胞增殖，低血清可最大程度抑制增殖）；研究增殖 + 遷移共同作用：加入常規(guī)完全培養(yǎng)基；

2. 將培養(yǎng)板放回 37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，做好實驗計時（從加液完成開始）。

06記錄劃痕愈合過程
（定位拍照，保證視野一致）
使用明美活細胞掃描分析儀MCS31的細胞劃痕模塊，應(yīng)用劃痕分析。