活細(xì)胞掃描分析儀動(dòng)態(tài)追蹤細(xì)胞遷移助力細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是解析細(xì)胞遷移的常規(guī)實(shí)驗(yàn)，常見于腫瘤學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。其核心實(shí)驗(yàn)邏輯為：在融合生長的細(xì)胞單層上用移液槍頭劃一道均勻的“劃痕”（模擬體內(nèi)組織損傷的“傷口”），洗去劃落的細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)，通過不同時(shí)間點(diǎn)觀察劃痕區(qū)域的細(xì)胞遷移、填充情況，量化細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的工作流程：

01實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
（溫馨提醒：提前1-2天完成，避免操作倉促）
1. 細(xì)胞準(zhǔn)備：復(fù)蘇目標(biāo)貼壁細(xì)胞，傳代培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期（細(xì)胞活性 80%-90%，遷移能力最強(qiáng)，避免老化細(xì)胞）；
2. 耗材試劑：6 孔板 / 12 孔板（最常用，劃痕視野適中）、無菌 10μL/200μL 移液槍頭（統(tǒng)一規(guī)格，保證劃痕寬度一致）、無血清培養(yǎng)基 / 低血清培養(yǎng)基（抑制細(xì)胞增殖，聚焦純遷移；若需研究 “增殖 + 遷移”，用常規(guī)完全培養(yǎng)基）、PBS 緩沖液、明美活細(xì)胞掃描分析儀MCS31
3. 耗材預(yù)處理：孔板可提前做標(biāo)記（在板底背面劃橫線，等距分布，方便后續(xù)定位同一劃痕區(qū)域拍照）。
 

02鋪板培養(yǎng)
（核心前提：形成致密細(xì)胞單層，單層無間隙）
1. 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，胰酶消化后用完全培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度（如 6 孔板約 5×10⁵個(gè) / 孔，12 孔板約 2×10⁵個(gè) / 孔，根據(jù)細(xì)胞大小微調(diào)）；
2. 按定濃度將細(xì)胞懸液加入標(biāo)記好的孔板，輕輕晃動(dòng)使細(xì)胞均勻分布，避免局部堆積；
3. 置于 37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，直至細(xì)胞形成100% 融合的致密單層（單層無空隙，否則會(huì)干擾劃痕愈合結(jié)果判斷）。

03畫制劃痕
（核心關(guān)鍵：劃痕均勻，無偏移、細(xì)胞殘留）
1. 取出培養(yǎng)板，超凈臺(tái)內(nèi)操作，用無菌移液槍頭（同一規(guī)格），沿板底提前劃好的橫線垂直勻速劃過細(xì)胞單層（可用孔板蓋子作為劃線工具，避免斜劃）；
2. 劃完后輕提槍頭，避免刮擦孔底導(dǎo)致細(xì)胞層脫落，肉眼觀察劃痕為清晰、連續(xù)的空白線條即可。

04清洗細(xì)胞
（去除劃落的細(xì)胞碎片，避免碎片干擾愈合）
1. 劃痕后，孔內(nèi)會(huì)有大量劃落的細(xì)胞和碎片，用無菌 PBS 緩沖液輕輕潤洗細(xì)胞層2-3 次；
2. 潤洗時(shí)緩慢滴加 PBS，沿孔壁流下，避免直沖劃痕區(qū)域?qū)е录?xì)胞脫落，最終洗去所有懸浮的細(xì)胞和碎片，使劃痕區(qū)域無殘留。

05加液培養(yǎng)
（定時(shí)放置培養(yǎng)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x培養(yǎng)基）
1. 按實(shí)驗(yàn)?zāi)康募尤雽?duì)應(yīng)培養(yǎng)基：研究純細(xì)胞遷移：加入無血清 / 低血清培養(yǎng)基（血清含生長因子，會(huì)促進(jìn)細(xì)胞增殖，低血清可最大程度抑制增殖）；研究增殖 + 遷移共同作用：加入常規(guī)完全培養(yǎng)基；

2. 將培養(yǎng)板放回 37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，做好實(shí)驗(yàn)計(jì)時(shí)（從加液完成開始）。

06記錄劃痕愈合過程
（定位拍照，保證視野一致）
使用明美活細(xì)胞掃描分析儀MCS31的細(xì)胞劃痕模塊，應(yīng)用劃痕分析。

圖1 MCS31及其細(xì)胞劃痕檢測(cè)界面

MCS31能夠輕松完成細(xì)胞劃痕的監(jiān)測(cè)與分析：

• 可以自動(dòng)識(shí)別劃痕區(qū)域
• 準(zhǔn)確定位同一視野下的細(xì)胞劃痕，使測(cè)量保持一致
• 自動(dòng)分析劃痕面積變化，最大限度提高實(shí)驗(yàn)效率，減少人為誤差
• 生成延時(shí)視頻，突破傳統(tǒng)的終點(diǎn)法測(cè)量，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞劃痕的動(dòng)態(tài)觀察。