T細胞攝取in vivo CAR-T載體的方式及機制
文章來源公眾號：胞內傳遞 作者：飛師兄
做in vivo CAR-T除了關注遞送載體，或許我們還應該調研一下用戶需求——T細胞如何攝取這些載體？膜融合還是內吞？
首先，內吞對于維持T細胞生理功能具有重要作用
內吞作用是 T 細胞通過細胞膜內陷形成囊泡，實現(xiàn)胞外物質內化或膜成分調控的關鍵機制，主要分為網格蛋白介導的內吞（CME） 和非網格蛋白介導的內吞（CIE） 兩大類，二者協(xié)同調控 T 細胞受體信號、抗原識別、細胞互作及代謝生長等核心功能。
簡單來說，CME 負責精準、持續(xù)的膜成分調控（如靜息 TCR 回收、CTLA-4 降解），CIE 負責快速、大量的響應（如抗原刺激后 TCR 內化、巨胞飲代謝供應），二者互補維持 T 細胞穩(wěn)態(tài)與功能。
T 細胞的內吞作用緊密結合其免疫功能，核心圍繞 TCR 信號調控、細胞互作、抗原處理及代謝生長展開。
舉兩個例子：
TCR 相關的內吞過程 —— 信號調控的核心
靜息狀態(tài)：未結合抗原的 TCR 通過 CME constitutively 內吞，隨后回收至細胞膜，維持膜上 TCR 穩(wěn)態(tài)。
抗原刺激后：
結合抗原的 TCR（ engaged TCR）同時通過 CME 和 CIE 內化：可溶性抗原刺激傾向 CME，膜結合抗原刺激傾向 CIE（依賴 TC21、RhoG 等 GTP 酶）。
巨胞飲與代謝支持
靜息 T 細胞中巨胞飲為組成性活動，激活后顯著增強，通過非特異性內化胞外氨基酸，轉運至溶酶體激活 mTORC1 通路，滿足 T 細胞克隆擴增的代謝需求。
T 細胞通過巨胞飲作用將細胞外氨基酸（亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸，即 LQRS）轉運至溶酶體，而這種轉運對于雷帕霉素機制性靶蛋白復合物 1（mTORC1）的激活至關重要，mTORC1 的激活則會驅動 T 細胞生長。
以上看出，從生理性角度，T 細胞主要通過內吞作用攝取外來物質，膜融合并非其生理性攝取外來物質的常規(guī)方式。
那現(xiàn)在的載體如何進入T細胞？
慢病毒載體 —— 膜融合為主，內吞為輔：
慢病毒表面糖蛋白（如 VSV-G）先與 T 細胞膜上受體結合，多數(shù)情況下直接觸發(fā)病毒包膜與細胞膜的融合，使病毒核心（含 CAR 基因）進入胞質，此過程不依賴內吞；經特殊改造的慢病毒（如靶向 T 細胞表面 CD3 的慢病毒），會先通過受體介導被 T 細胞以網格蛋白介導的內吞（CME）攝入形成內體，再通過內體膜融合釋放。
LNP 載體 —— 依賴內吞（CIE/CME）：
LNP 通過表面配體（如靶向 T 細胞的抗體或肽段）與 T 細胞膜結合后，主要被 T 細胞以非網格蛋白介導的內吞（CIE，如巨胞飲）或 CME 攝入，形成內體；后續(xù)需通過 “內體逃逸” 機制突破內體膜進入胞質，釋放包裹的 CAR mRNA。當然，現(xiàn)在也有著力于開發(fā)膜融合的LNP，借助于脂質構成的改變。
這么看病毒和LNP分別是膜融合和內吞的代表，那么哪個方案更好？
內吞內吞齊（七）步走：啟動-組裝-招募-彎曲-斷裂-塑形-釋放：更適配 T 細胞生理機制，技術成熟、安全性高，適合需規(guī)�；莾群w逃逸需要優(yōu)化。
膜融合膜融合的機制（二）病毒與細胞的膜融合：理論遞送效率更高（繞開內體降解），但非 T 細胞生理方式，如果用病毒存在安全風險，免疫原性等。
從理論上看，結合 T 細胞生理性內吞的靶向性與膜融合的高效逃逸能力的復合方案，是兼顧安全、精準與效率的最優(yōu)選擇。病毒或者LNP可能并不是選擇題in vivo CAR-T：慢病毒還是tLNP？，而是綜合題，或者還有其他更適合的載體，是多選題。
拭目以待吧，這才幾年。
