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脂質(zhì)納米粒(LNP)遞送mRNA的機(jī)制及轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟

瀏覽次數(shù)：708　發(fā)布日期：2025-11-25　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

背景介紹
裸露的RNA是帶負(fù)電荷的親水性大分子，因?yàn)榧?xì)胞膜的靜電排斥，難以進(jìn)入細(xì)胞，且易被無(wú)處不在的RNA酶快速降解，所以需要保護(hù)性外殼才能進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞膜的組成主要是脂質(zhì)，利用脂質(zhì)囊泡包封RNA穿過(guò)細(xì)胞膜并將RNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。囊泡應(yīng)該是一種帶正電的脂質(zhì)，才能夠結(jié)合帶負(fù)電的RNA。

然而，由永久性陽(yáng)離子脂質(zhì)組成的囊泡由于能與帶負(fù)電的細(xì)胞膜發(fā)生靜電作用而引起細(xì)胞毒性，脂質(zhì)結(jié)構(gòu)才能夠?qū)?nèi)體酸性環(huán)境響應(yīng)而帶正電荷的分子。

脂質(zhì)納米粒結(jié)構(gòu)
LNP通常由四種關(guān)鍵成分組成：可離子化的陽(yáng)離子脂質(zhì)、磷脂（兩性離子脂質(zhì)）(PL)、膽固醇和PEG化脂質(zhì)。

脂質(zhì)納米粒遞送機(jī)制
脂質(zhì)納米粒(LNP)作為mRNA的傳遞系統(tǒng)，其作用機(jī)制涉及多個(gè)步驟，確保mRNA安全有效地遞送到目標(biāo)細(xì)胞并表達(dá)蛋白。在LNP中，可電離的陽(yáng)離子脂質(zhì)發(fā)揮著重要作用，因?yàn)樗梢詭д姾傻陀谄銴a以介導(dǎo)在自組裝成LNP期間負(fù)載帶負(fù)電荷的RNA，在中性pH下不帶電以最大限度地減少毒性，并在細(xì)胞吸收后再次帶正電荷以促進(jìn)內(nèi)體逃逸隨著內(nèi)體pH降低。膽固醇和PEG脂質(zhì)的變體已被證明可以調(diào)節(jié)LNP物理性質(zhì)、納米結(jié)構(gòu)和最終功效。兩性離子磷脂通常被稱為“輔助脂質(zhì)”。LNPs在保護(hù)mRNA、促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)傳遞、以及激活免疫反應(yīng)方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。

LNP轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟
下述轉(zhuǎn)染步驟中為6孔板單孔參考條件。對(duì)于其他培養(yǎng)形式，請(qǐng)參考表1。

1、mRNA 預(yù)混液制備
將2.5ug mRNA（濃度為1ug/uL）與60uL Buffer混合。
2、mRNA-easyLNP復(fù)合物
將62.5uL mRNA預(yù)混液與62.5uL easyLNP納米混懸液混合，渦旋2-3s，混勻。
3、加入細(xì)胞
將125uL mRNA-easyLNP復(fù)合物加入細(xì)胞，輕輕晃動(dòng)使均勻分散。
4、分析時(shí)間
培養(yǎng)24-48h后分析。

表1 根據(jù)每孔使用的細(xì)胞培養(yǎng)容器的mRNA轉(zhuǎn)染指南

mRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟	試劑	96孔板	24孔板	6孔板
（1）40ng/μL mRNA預(yù)混液制備	Buffer(以mRNA原液濃度1μg/μL為例)	2.4μL	12μL	60μL
（1）40ng/μL mRNA預(yù)混液制備	mRNA	0.1μg	0.5μg	2.5μg
（2）mRNA-easyLNP復(fù)合物制備	easyLNP納米混懸液	2.5μL	12.5μL	62.5μL
（2）mRNA-easyLNP復(fù)合物制備	mRNA預(yù)混液	2.5μL	12.5μL	62.5μL
（3）加入細(xì)胞	mRNA-easyLNP復(fù)合物	5μL	25μL	125μL

實(shí)驗(yàn)示意圖：

產(chǎn)品推薦：

轉(zhuǎn)染方式	貨號(hào)	品名	規(guī)格
細(xì)胞	abs60339	mRNA轉(zhuǎn)染試劑	1mL
	abs60620	easyLNP™ mRNA免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒	1.5mL/3mL/5mL
	abs60621	easyLNP™ Plus通用型RNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒	1.5mL/3mL/5mL
	abs60322	Lipofect5000質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑	0.5mL/1.0mL
	abs60255	質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒(貼壁細(xì)胞)	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60256	PM原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60327	SP懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60369	RF 293細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染試劑盒	0.5mL/1.5mL
	abs60259	核酸轉(zhuǎn)染試劑盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60324	PM原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60325	SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60252	小核酸轉(zhuǎn)染試劑	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60253	PM原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60254	SP懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60317	核酸共轉(zhuǎn)染試劑	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs7993	50nm磁轉(zhuǎn)染試劑	100uL
轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑	abs42025397	聚凝胺溶液	1mL
	abs42085824	海美溴銨	5g
	abs42085198	魚精蛋白硫酸鹽	5g/25g
動(dòng)物體內(nèi)	abs60622	easyLNP™ mRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑盒(全身作用)	0.3mL/0.5mL/1mL
動(dòng)物體內(nèi)	abs60623	easyLNP™ mRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑盒(局部作用)	0.3mL/0.5mL/1mL
核酸轉(zhuǎn)染(動(dòng)物體內(nèi))	abs60258	Elite Fect-I小核酸活體組織轉(zhuǎn)染試劑(小鼠轉(zhuǎn)染)	3只/6只

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