單細(xì)胞懸液制備儀在解離小鼠骨骼肌中的應(yīng)用及具體操作步驟

一、骨骼研究的細(xì)胞關(guān)卡
骨骼肌作為機(jī)體代謝與運(yùn)動(dòng)的關(guān)鍵組織，其細(xì)胞異質(zhì)性研究近年來(lái)成為前沿?zé)狳c(diǎn)。無(wú)論是肌肉再生機(jī)制探索、衰老研究，還是肌少癥等疾病模型的構(gòu)建，獲取高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液都是下游單細(xì)胞RNA測(cè)序、流式分析等技術(shù)的決定性一步。

傳統(tǒng)的小鼠骨骼肌解離長(zhǎng)期面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)：手工研磨與酶消化相結(jié)合的方法不僅耗時(shí)費(fèi)力(常需3-4小時(shí))，且細(xì)胞得率與活性波動(dòng)大，這些痛點(diǎn)直接制約了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性與數(shù)據(jù)質(zhì)量。

二、儀器優(yōu)勢(shì)：程序化與溫和解離的革命
凈信單細(xì)胞懸液制備儀的核心突破在于，它將原本分散、依賴人工經(jīng)驗(yàn)的多步操作整合進(jìn)一個(gè)封閉、自動(dòng)化的系統(tǒng)。其優(yōu)勢(shì)顯著：

1.程序化消解：精準(zhǔn)控溫以及轉(zhuǎn)速可控，避免因手工操作不一致導(dǎo)致的過(guò)度消化或消化不足。

2.保護(hù)細(xì)胞活性：溫和的磁珠運(yùn)動(dòng)替代暴力研磨，配合實(shí)時(shí)溫控，將細(xì)胞從應(yīng)激損傷中“解放”出來(lái)，保障高活性。

三、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵步驟
1.樣本前處理
快速取得骨骼肌，置于緩沖液中，去除明顯脂肪與筋膜，將組織轉(zhuǎn)移到消化管中，使用眼科剪剪碎，加入適量消化酶(采用酶離者的骨骼肌組織消化試劑盒)。

2.儀器參數(shù)設(shè)置
在儀器觸控面板設(shè)定消化程序(37℃，選擇合適的消化程序)，點(diǎn)擊啟動(dòng)，儀器開(kāi)始運(yùn)行。

消化過(guò)程中可以打開(kāi)蓋子(運(yùn)行暫停)觀察消化狀態(tài)。

3.樣本處理過(guò)程
解離完成后可以取出消化管，使用40微米的濾網(wǎng)過(guò)濾，隨后加入適量的終止液終止消化。根據(jù)情況可搭配去碎片劑去除細(xì)胞碎片。

4.收樣與質(zhì)檢
收樣與質(zhì)檢，離心洗滌后，使用臺(tái)盼藍(lán)染色或AOPI染料，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器評(píng)估細(xì)胞活性與數(shù)量。所得懸液可直接用于10x Genomics單細(xì)胞建庫(kù)或流式分選。

5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
本次制備的骨骼肌細(xì)胞活率達(dá)到96.43%。

單細(xì)胞懸液制備儀的引入，將研究人員從繁瑣、高變異性的手工勞動(dòng)中解放出來(lái)，使得高通量、高重復(fù)性的骨骼肌單細(xì)胞研究成為可能。這不僅提升了數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量，更縮短了實(shí)驗(yàn)周期，讓科研人員能將精力更多地集中于科學(xué)問(wèn)題本身。

該技術(shù)的穩(wěn)定應(yīng)用，正助力我們更清晰地解析骨骼肌中干細(xì)胞、肌纖維、免疫細(xì)胞等群體間的互作網(wǎng)絡(luò)，為理解肌肉生理與病理打開(kāi)一扇更精細(xì)的窗口。未來(lái)，隨著程序的進(jìn)一步優(yōu)化，它有望拓展至更多纖維化程度高、難解離的組織類型，持續(xù)推動(dòng)組織生物學(xué)研究進(jìn)入單細(xì)胞新時(shí)代。