對人源iPS誘導衍生的心肌細胞解凍效率研究

細胞解凍是生命科學和醫(yī)學領域中的關鍵步驟。確保冷凍細胞溫和解凍對于保持其活力和功能至關重要。

細胞的冷凍和解凍過程都會直接影響細胞復蘇后的回收率和細胞活力，這是細胞培養(yǎng)中兩個重要的質量方面。無論處理原代細胞、細胞系還是干細胞，遵循正確的步驟以確保解凍成功都是至關重要的。

隨著細胞治療與相關醫(yī)療技術的開發(fā)，大規(guī)模的細胞過程處理操作是必不可少的。然而，更多研究表明大規(guī)模的細胞培養(yǎng)與相關凍存操作需格外注意，然而，同源自體細胞，它不能直接用于治療，而需要誘導培養(yǎng)操作。因此，由捐贈者提供的細胞同源異體細胞（ES細胞、iPS細胞）受到了更廣泛的關注。通過從捐贈者身上預先收集并擴增培養(yǎng)細胞，這些細胞就能更快地用于治療。與此同時，我們用CryoMACS凍存袋和ThawSTAR CB進行相關測試。

準備實驗：

▶ [細胞來源] 無差別的人源iPS細胞

▶ [分裝體積] 70mL細胞懸液

▶ [細胞密度] 5x106 個/mL

▶[凍存液] STEM-CELLBANER®

▶[凍存時間] 大約1.5個月

▶[凍存袋] CryoMACS Freezing Bag 250mL

測試結果:

▶ [解凍時間] 30min.(47個2mL凍存管解凍時間共計90min)

▶[解凍活率] 95.5%

▶[解凍后細胞傳代擴增] 原代細胞0.1x106個細胞，培養(yǎng)4天

250mL凍存袋傳代2.55次，標定凍存管：2.49次，47個2mL凍存管：1.85次

●結論：通過細胞凍存袋實現大劑量的細胞冷凍與解凍，提高了工作效率，減少了細胞凋亡的風險。

實驗：在本次實驗中，我們兩次冷凍、與解凍細胞，這些細胞來自人源iPS誘導培養(yǎng)。

▶ [細胞來源] 心肌細胞來源于人源iPS細胞，這些細胞在15~17天誘導分化后被收集。

▶ [分裝體積] 20mL細胞懸液

▶ [細胞密度] 5x106 個/mL

▶[凍存時間] 在-150℃條件下1~2周

▶[凍存袋] CryoMACS Freezing Bag 50mL （50mL的凍存袋相當于14個2mL的凍存管細胞裝量，細胞懸液總體積21mL）

工作時間和解凍后活率

*14個凍存管（總液體體積:21mL）按照以上步驟，累計用時超過1小時，活率94%

*50mL凍存袋（液體總量:20mL）第一次測試，累計用時20分鐘左右，活率91%

*50mL凍存袋（液體總量:20mL）第二次測試，累計用時20分鐘左右，活率91.5%

▶培養(yǎng)后評估：

解凍后進行貼壁培養(yǎng)

結論：50mL袋裝細胞的貼壁情況與14個凍存管的細胞相當。

通過索尼SI8000流式細胞分析：在解凍后進行的6天貼壁培養(yǎng)之后數據如下：