瑞孚迪pHSense™ Eu高信噪比熒光探針的優(yōu)勢

高信噪比+免洗流程+廣泛兼容性，讓內吞檢測不再困難

在抗體偶聯藥物（ADC）和GPCR靶點藥物研發(fā)中，內吞效率是決定藥物療效的關鍵因素。然而，傳統(tǒng)檢測方法一直面臨著背景干擾強、操作復雜、通量低等痛點。

瑞孚迪（Revvity）新推出的pHSense™ Eu探針，通過將pH敏感型Eu探針與時間分辨熒光（TRF）檢測技術巧妙結合，為ADC及GPCR研究帶來了突破性解決方案！

傳統(tǒng)內吞檢測方法面臨哪些困境？

ADC內吞檢測方面，傳統(tǒng)方法各有局限：

l 基于活細胞成像+pH探針的檢測：儀器成本高，懸浮細胞成像困難，信噪比低

l 基于毒素偶聯的殺傷檢測：易受非特異性影響產生假陽性，不支持實時動力學檢測

l 基于流式+pH探針的檢測：背景熒光高，需避光操作，重復性一般

l 基于溫度轉變的熒光二抗檢測：不能實現定量標準化，重復性差

GPCR內吞檢測方面：

l 基于報告基因技術：僅適用于基因改造細胞系，成本高昂

l 酶片段互補技術：僅適用于特定修飾細胞系，不支持實時動力學檢測

pHSense™ Eu探針的三大創(chuàng)新優(yōu)勢

1. 創(chuàng)新原理：低背景、高信噪比檢測

pH敏感激活機制：探針在胞外中性環(huán)境（pH≥7）時熒光信號極弱，當被內吞進入內體/溶酶體（pH 4.5-6.5）后，信號強度和壽命隨pH值降低而顯著增強。

TRF技術提升信噪比：620nm毫秒級熒光壽命搭配微秒級延遲檢測，輕松消除背景中非特異性信號干擾。

2. 操作簡便：適配高通量檢測

采用“免洗”流程結合酶標儀檢測，大大簡化操作步驟。以貼壁細胞為例，只需四步：細胞鋪板 → 棄上清 → 加樣孵育 → 酶標儀讀數。

僅需帶TRF模塊的酶標儀就可在約3分鐘內采集96孔數據，支持96和384孔板通量，大幅提升檢測效率。

3. 廣泛兼容性

兼容多種細胞類型：無論是懸浮細胞還是貼壁細胞，都能獲得優(yōu)異的檢測效果，支持動力學檢測和終點法檢測。

在實際應用中，使用pHSense™ Eu檢測曲妥珠單抗在BT-474貼壁細胞中的內吞信號呈現劑量依賴型增強，與靶標HER2的特異性結合能力符合預期藥效曲線。

對于傳統(tǒng)細胞成像技術難以處理的懸浮細胞內吞檢測，pHSense™ Eu同樣表現出色。使用該探針檢測利妥昔單抗在Raji懸浮細胞中的內吞信號及動力學檢測數據與文獻報道一致，為抗體藥或ADC在非貼壁細胞系中的評價提供了簡潔、高效的標準化解決方案。

兼容不同的ADC結構：能夠克服傳統(tǒng)方法對ADC結構差異的敏感性，為不同DAR值、連接子類型的ADC提供可比性數據。

實驗表明，使用pHSense™探針檢測曲妥珠單抗及其不同結構ADC藥物時，所有測試樣本均呈現劑量依賴性內吞信號增強，且EC50值幾乎一致。

兼容多種細胞系：支持SNAP-tag、Flag-tag的商品化細胞系及原代細胞系，靈活適配不同研究模型。

對于GPCR藥物研發(fā)，pHSense™ Eu探針可輕松實現GPCR內化過程的動態(tài)全景監(jiān)測，為GPCR類藥物開發(fā)提供了從分子機制到臨床轉化的關鍵評估工具。

pHSense™ Eu探針以“高信噪比+高通量+酶標儀實時檢測”三位一體的優(yōu)勢，成功突破了內吞檢測的技術瓶頸，將有力推動ADC/GPCR藥物從靶點驗證到臨床前研究的全程加速！