放線(xiàn)菌酮WB、Cell Viability Assay、IF、RT-PCR實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)匯總

 
2、Cell. 2024 Apr 25;187(9):2288-2304.e27.

環(huán)己酰亞胺（0.5μM）阻斷 SLC6A6-KD CD8 + T 細(xì)胞中的整體蛋白質(zhì)合成，包括 ATF4 的合成。

 
3、Circulation. 2024 May 28;149(22):1752-1769.

用 4-HNE 和 CHX（100μg/mL）處理的 mVSMC 中 Runx2 水平的蛋白質(zhì)印跡分析長(zhǎng)達(dá) 12 小時(shí)（n = 9）。

 
2、Circulation. 2024 May 28;149(22):1752-1769.

用 4-HNE 和 CHX（100μg/mL）處理的 mVSMC 中 Runx2 水平的蛋白質(zhì)印跡分析長(zhǎng)達(dá) 12 小時(shí)（n = 9）。

 
3、Mol Cancer. 2024 Jul 9;23(1):141.

蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)己酰亞胺（20μM）對(duì) PFKP 耗盡的 LIU-LSC-1 細(xì)胞中 c-Myc 穩(wěn)定性隨時(shí)間推移的影響。蛋白質(zhì)印跡（左）和半定量（右）對(duì) PFKP 和 c-Myc 穩(wěn)定性的蛋白質(zhì)表達(dá)。

 
2、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.

IRE1α簇（紅色）與 G3BP1（綠色）共定位在用二甲基亞砜（DMSO）對(duì)照（Ctrl），Tg（1μM，3 小時(shí)），SA（500μM，1 小時(shí)）或 HS（43°C，1 小時(shí)）處理的 HeLa 細(xì)胞中具有代表性的 IF 圖像在沒(méi)有或存在 CHX（10μg/mL）預(yù)處理的情況下。

 
2、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.

在 3 h Tg 處理之前，將 HeLa 細(xì)胞預(yù)處理 1 小時(shí)環(huán)己酰亞胺（CHX，10 μg/mL）。代表性的瓊脂糖凝膠顯示 XBP1 mRNA 剪接水平的 RT-PCR 分析。

 
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05
體外研究(In Vitro)

Cycloheximide (200µM，2 或 10 分鐘) 在體外抑制 eEF2 介導(dǎo)的 tRNA 易位[1]。
Cycloheximide (35 μM，1 或 4 小時(shí)) 抑制兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和 J774A.1 巨噬細(xì)胞新生蛋白合成[4]。

Cycloheximide (0.5-1 μg/mL，1-3 天) 抑制 C6 膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在 G1 期和 S 期，促進(jìn) C6 膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化[5]。

注意事項(xiàng):
1. 傳代次數(shù)、細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞密度都可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。需要調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)至較好時(shí)開(kāi)展實(shí)驗(yàn) (HCT 116 貼壁細(xì)胞形態(tài)較小，密度大時(shí)容易聚團(tuán)，鋪細(xì)胞盡量均勻)；
2. 不同細(xì)胞系對(duì) Cycloheximide 敏感度不同，檢測(cè)指標(biāo)可能有差異，建議參考文獻(xiàn)，提前做預(yù)實(shí)驗(yàn) (摸索藥物處理時(shí)間、濃度，抗體條件)，確定實(shí)驗(yàn)方案合理可行；
3. 藥物現(xiàn)配現(xiàn)用，可超聲加熱助溶，直至溶液澄清透明; 首次實(shí)驗(yàn)用不完時(shí)需分裝凍存 -20℃；
4. 檢測(cè)指標(biāo) MDM2、c-Myc 蛋白出現(xiàn)雙條帶，可能是發(fā)生了翻譯后修飾；
a. c-Myc存在多種翻譯后修飾 (c-Myc 多個(gè)位點(diǎn)存在磷酸化修飾、乙�；�修飾、泛素化修飾、糖基化修飾)，常出現(xiàn)實(shí)際檢測(cè)分子量與預(yù)測(cè)條帶大小不符，或者兩條條帶現(xiàn)象[6]。
b. MDM 2 存在多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，預(yù)測(cè)分子量為 55 kDa，但由于存在多種異構(gòu)體和翻譯后修飾，以及 p53 激活時(shí)對(duì) MDM2 有剪切作用，實(shí)測(cè)分子量大小為 90 kDa，60 kDa，可能觀(guān)察到多個(gè)條帶[7]。

06
體內(nèi)研究(In Vivo)

Cycloheximide (30、60 或 120 mg/kg, 在用 200 μA 電擊訓(xùn)練之前注射）對(duì)小鼠記憶測(cè)試試驗(yàn)的潛伏期有顯著影響 (P<0.001)。在鹽水對(duì)照中，這種電擊水平導(dǎo)致測(cè)試試驗(yàn)的延遲明顯高于訓(xùn)練中的延遲。Cycloheximide (30 mg/kg，注射) 導(dǎo)致測(cè)試試驗(yàn)的潛伏期明顯高于鹽水對(duì)照組。接受較高劑量注射 Cycloheximide 的小鼠在測(cè)試試驗(yàn)中的潛伏期與鹽水組相當(dāng)，即在這些條件下較高劑量既不增強(qiáng)也不損害記憶，導(dǎo)致倒 U 型劑量反應(yīng)曲線(xiàn)用于 Cycloheximide 增強(qiáng)記憶[2]。

Cycloheximide (200 mg/kg, 腹腔注射，KA 給藥前 20 分鐘) 在 Kainic acid (KA) (HY-N2309) 誘導(dǎo)的小鼠海馬原代神經(jīng)元中抑制細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶 (p-ERK)、c-Jun N-末端激酶 1 (p-JNK1) 和鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)性蛋白激酶 II (p-CaMK II) 的磷酸化，以及 c-Fos 和 c-Jun 蛋白表達(dá)增加[8]。