抗體保存避坑指南及適用于IHC實(shí)驗(yàn)的稀釋液配方

我知道你急，但你先別急。
尊敬的 MCE 客戶，當(dāng)您收到我司抗體時，您將看到：

 
抗體，常用于高特異性地識別和結(jié)合目標(biāo)分子，從而實(shí)現(xiàn)定量分析、細(xì)胞標(biāo)記等功能。不當(dāng)保存會導(dǎo)致抗體活性下降，降低結(jié)合能力，引發(fā)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致，最終浪費(fèi)時間和經(jīng)費(fèi)，還可能得出錯誤的結(jié)論，影響科學(xué)發(fā)現(xiàn)的進(jìn)程。

MCE 在線提醒：
1. 及時取件，收到快遞后立即取出，檢查冰袋是否完全融化。
2. 核對產(chǎn)品信息，第一時間閱讀說明書，確認(rèn)保存條件。
 

 
Section.01
抗體保存指南

抗體儲存的“保存期限”長短不一，從數(shù)周到數(shù)年都有可能，這主要受抗體自身特性的影響。抗體保存期限也受到儲存條件，如溫度、緩沖液成分等制約。因此：

重要的事情說三遍，先看說明書，必看說明書，一定要看說明書！

不要開蓋，直接離心!

為防止抗體溶液沾在管壁或管蓋上，使用前請勿開蓋，先離心 (約 10,000 ×g) 處理 20-30 s，使附于管蓋或管壁的抗體收集于管底。MCE 保證每管產(chǎn)品的抗體總量達(dá)到標(biāo)示含量。

分裝

反復(fù)凍融會使抗體變性，導(dǎo)致抗體形成聚合物，從而降低抗體的結(jié)合能力。因此，我們建議分裝儲存——以減少反復(fù)凍融造成的損害并防止污染。

首先，分裝適用于大容量抗體，如 50 μL- 100 μL。

其次，分裝成小份時，具體每管分裝的量建議以一次實(shí)驗(yàn)用完為準(zhǔn)，且每管分裝體積不低于 10 μL，注意是否需避光環(huán)境。

儲存

抗體儲存是關(guān)鍵！妥善保存可保持其活性和穩(wěn)定性，延長其使用壽命，并防止污染。同時可以避免因反復(fù)凍融、降解或污染而造成的活性損失，保證抗體能夠精準(zhǔn)識別和結(jié)合目標(biāo)抗原，并在實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮作用。

儲存須知

Butttt，抗體里可不只有抗體！
 

 
當(dāng)然，每個抗體都有自己獨(dú)特的特性，如下表所示，MCE 的研發(fā)團(tuán)隊(duì)根據(jù)不同抗體的特性，針對性使用不同緩沖體系，并在此基礎(chǔ)上調(diào)整蛋白保護(hù)劑的劑量，選擇最合適的防腐劑，加入冷凍保護(hù)劑等，以此來實(shí)現(xiàn)最大的保留及呈現(xiàn)抗體的最佳性能，助力科研工作：

 
儲存溫度

接下來就到了我們最最最最重要的抗體儲存工作！很多小伙伴們對溫度很是糾結(jié)：4 ℃，?20 ℃，?80 ℃；到底哪個更好些？其實(shí).....

就 MCE 抗體產(chǎn)品來說，常見保存條件如下：

• 對于短期儲存：絕大多數(shù)抗體產(chǎn)品在 4°C 可穩(wěn)定保存 1-2 周�？贵w工作液建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用。
  對于長期儲存：絕大多數(shù)抗體在 -20°C 下可穩(wěn)定保存 1 年。

 
對于 MCE 其他特殊類型的抗體，如下表所示：

 
儲存位置

儲存位置？這.....平時都是冰箱哪有位置放哪里，尤其是冰箱側(cè)門架子上，分裝管剛好“站住腳”！
啊啊啊啊啊啊��！施主請自重！萬萬使不得啊~

避雷！

• 避免放在門架上或頻繁開關(guān)的部位：冰箱門架溫度波動大，同門開冰箱門找東西時可能停留時間較長，造成的溫度變化。

——將抗體存放在冰箱內(nèi)側(cè)靠近后壁的位置，這是溫度最穩(wěn)定的區(qū)域。

• 不要使用無霜冰箱 (自動除霜冰箱)：避雷避雷，無霜冰箱會自動升溫除霜導(dǎo)致抗體被凍融。

 
總之，影響抗體穩(wěn)定性的因素很多，大家一定要避免多次凍融。

Section.02
抗體搭檔: 稀釋液

當(dāng)然，當(dāng)稀釋成工作液，建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用。

但是自己配的稀釋液總是不如商品化稀釋液好用，比如抗體活性更持久，更不易長菌等。許多用商業(yè)化稀釋液稀釋后的抗體工作液保存一年甚至更久仍然有效，這也是商業(yè)化即用型抗體效期很長的其中一個關(guān)鍵原因，即稀釋液配方更科學(xué)！

接下來我們拆解一個適用于 IHC 實(shí)驗(yàn)的稀釋液配方：

 
成分有了，劑量有了，那我們是不是可以自己配了？

且慢，配制操作簡單，但這其中的工藝可大有名堂！

實(shí)驗(yàn)室自制試劑無法保證配制環(huán)境無菌操作、配制批間差不可控等，這些都會直接對抗體性能產(chǎn)生影響。

 
由此可見，選用工業(yè)化生產(chǎn)的試劑，結(jié)果穩(wěn)定性與重復(fù)性更高，給實(shí)驗(yàn)減少一部分不確定性。

MCE 提供多種配方的稀釋液，滿足不同的需求：

 
Section.03
保護(hù)盾: 蛋白酶抑制劑

WB 結(jié)果如同開“盲盒”？條帶時有時無？若隱若現(xiàn)？有時候可能是因?yàn)樗��?mdash;— 蛋白酶抑制劑：避免你的蛋白被降解。

一起來見證“獵殺”時刻！

使用枯草桿菌蛋白酶 Carlsberg (Subtilisin Carlsberg，SC) 對溶菌酶進(jìn)行蛋白水解，然后立即添加溶解在二甲基亞砜 (DMSO) 中的 2 mM PMSF 來淬滅反應(yīng)。

圖 1 顯示 SC 可在反應(yīng)開始后 10 分鐘內(nèi)促進(jìn)溶菌酶完全蛋白水解 。加入蛋白酶抑制劑后，不再觀察到蛋白水解片段，而是在凝膠上清晰地看到一條與天然分子具有相似遷移率的條帶，這表明加入 PMSF 后，蛋白水解的溶菌酶的缺口末端重新連接生成天然形式。

圖 1. 溶菌酶的蛋白水解和再連接反應(yīng)^[1]。

難道是意外？再來測測別的——測試 PMSF 對另一種底物 d-乙內(nèi)酰脲酶蛋白水解反應(yīng)的影響。

d-乙內(nèi)酰脲酶 (d-hydantoinase)：一種來自芽孢桿菌 AR9 的 54 kDa 單體蛋白。在 37 °C 下，以 100:1 w/w 比例的乙內(nèi)酰脲酶與 SC 在 50 mM Tris pH 8.0 存在下進(jìn)行蛋白水解，并通過在中間時間點(diǎn)收集等分試樣來監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。最后，通過添加 2-3 mM PMSF 猝滅反應(yīng)。圖  2 表明，在添加抑制劑后，部分蛋白水解的乙內(nèi)酰脲酶不再出現(xiàn)碎片化。

圖 2. d-乙內(nèi)酰脲酶的蛋白水解和再連接反應(yīng)^[1]。

蛋白酶抑制劑通過保護(hù)抗體所處“環(huán)境”來間接提高抗體穩(wěn)定性，在抗體制劑中扮演“保護(hù)盾”的角色。主要通過阻斷蛋白酶降解途徑來保持抗體完整性和功能，從而提高抗體藥物或診斷制劑的穩(wěn)定性和安全性。

 

產(chǎn)品推薦

GPX4 抗體 (YA399) (HY-P80450) GPX4 Antibody 是一個非偶聯(lián)、分子量約 22 kDa、兔源、抗 GPX4 單克隆抗體

HRP-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HY-P8001) HRP-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG H&L 是偶聯(lián)了 HRP 標(biāo)記、山羊來源的抗兔 IgG 抗體

Collagen I 抗體 (HY-P81227) Collagen I Antibody 是一個非偶聯(lián)、分子量約 130 kDa、兔來源、抗 Collagen I 多克隆抗體

Cleaved-Caspase-1 抗體 (HY-P80622) Cleaved-Caspase-1 Antibody 是一個非偶聯(lián)、兔源、抗 Cleaved-Caspase 1 多克隆抗體

Myc-tag 抗體 (YA702) (HY-P80232) Myc-tag Antibody 是一個非偶聯(lián)、小鼠來源的抗 Myc-tag 單克隆抗體

IL-1 beta 抗體 (HY-P80720) IL-1 beta Antibody 是一個非偶聯(lián)、分子量約 17 kDa、兔源、抗 IL-1 beta 多克隆抗體

YKDDDDK Tag (FLAG) 抗體 (YA780) (HY-P80111) DYKDDDDK Tag (FLAG) Antibody 是一個非偶聯(lián)、小鼠來源的抗 DYKDDDDK Tag (FLAG) 單克隆抗體

Beta Actin 抗體 (YA823) (HY-P80438) DYKDDDDK Tag (FLAG) Antibody 是一個非偶聯(lián)、小鼠來源的抗 DYKDDDDK Tag (FLAG) 單克隆抗體

 

[1] Sharma A, et al. Serine protease inhibitor mediated peptide bond re-synthesis in diverse protein molecules. FEBS Lett. 2011 Nov 4;585(21):3465-70.