ELISA試驗手工洗滌具體操作步驟

ELISA 即酶聯(lián)免疫吸附測定，是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過酶標(biāo)儀測定待測物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測物濃度。ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，洗滌在ELISA試驗過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻也決定著實驗的成敗。

ELSIA試驗就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來�？梢哉f在ELISA試驗操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)。洗滌的方式除某些ELISA試驗儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：

1.浸泡式
①吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；
②用洗滌液過洗一遍；
③浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1～2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短；
④吸干孔內(nèi)液體，吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾上拍干；
⑤重復(fù)操作③和④，洗滌3～4次。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。

2.流水沖洗式
流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。