Chloroquine氯喹作用機(jī)制及其應(yīng)用案例分享

 
Chloroquine 氯喹作用機(jī)制與應(yīng)用介紹

自噬與凋亡：氯喹廣泛應(yīng)用于體外實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)提高溶酶體 pH 值來(lái)阻斷自噬小體的降解，從而抑制自噬通量。這種機(jī)制幫助研究人員確定自噬在各種細(xì)胞環(huán)境中的作用，尤其是在癌癥研究中，它常與其他抗癌藥物聯(lián)合使用以增強(qiáng)其效果。

細(xì)胞生物學(xué)與病毒學(xué)：作為一種弱堿，氯喹在酸性細(xì)胞內(nèi)區(qū)室（如內(nèi)體和溶酶體）中積累，增加其 pH 值。這種干擾細(xì)胞器酸化的作用被用于研究中介導(dǎo)的內(nèi)體過(guò)程和病毒進(jìn)入細(xì)胞，因?yàn)樵S多病毒需要低 pH 值進(jìn)行融合和復(fù)制。

抗原呈遞與免疫學(xué)：在免疫學(xué)研究中，氯喹通過(guò)干擾這些功能所需的酸性環(huán)境來(lái)抑制樹(shù)突狀細(xì)胞、B 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的抗原處理和呈遞。它還調(diào)節(jié)細(xì)胞因子產(chǎn)生和 Toll 樣受體（TLR）信號(hào)通路。

DNA 相互作用：在分子生物學(xué)中，氯喹在高濃度下能嵌入雙鏈 DNA，這一特性被用于研究 DNA-配體相互作用及其潛在的細(xì)胞毒性效應(yīng)。

血庫(kù)應(yīng)用：磷酸氯喹（CDP）是血庫(kù)實(shí)驗(yàn)室中一種有用的試劑，用于從紅細(xì)胞中去除結(jié)合的 IgG 抗體，這允許對(duì)進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性患者的表型進(jìn)行準(zhǔn)確分型和抗體鑒定。

Chloroquine 氯喹實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分享

體外研究(In Vitro)

用CQ（30μM）或MG 132（100 nM）預(yù)處理A375細(xì)胞2小時(shí)，然后用CCCP/FeSO 4加甘露糖處理24小時(shí)。微管蛋白用于確定負(fù)載蛋白的量。

摘要

焦亡是由 gasdermin 家族成員執(zhí)行的一種調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡。然而，gasdermin 介導(dǎo)的 Pyroptosis 如何負(fù)調(diào)控仍不清楚。

在這里，我們證明甘露糖（己糖）可通過(guò)激活 AMP 激活蛋白激酶（AMPK），抑制 GSDME 介導(dǎo)的焦亡。

在機(jī)制上，己糖胺生物合成途徑中的甘露糖代謝會(huì)增加代謝物 N - 乙酰葡糖胺 - 6 - 磷酸（GlcNAc-6P）的水平，該代謝物可結(jié)合 AMPK，促進(jìn)其通過(guò) LKB1 磷酸化�；罨�的 AMPK 進(jìn)而在 Thr 6 位點(diǎn)磷酸化 GSDME，這一過(guò)程會(huì)阻斷半胱天冬酶 - 3 誘導(dǎo)的 GSDME 切割，從而抑制焦亡。

AMPK 介導(dǎo)的 GSDME 磷酸化的調(diào)節(jié)作用，在 AMPK 敲除小鼠以及 GSDMET6 E 或 GSDMET6 A 敲入小鼠中得到了進(jìn)一步證實(shí)。

在小鼠原發(fā)性癌癥模型中，甘露糖給藥可抑制小腸和腎臟中的焦亡，減輕順鉑或奧沙利鉑誘導(dǎo)的組織毒性，且不損害抗腫瘤作用。

甘露糖的保護(hù)作用也在一小群接受常規(guī)化療的胃腸道癌癥患者中得到了驗(yàn)證。

我們的研究揭示了甘露糖通過(guò) GlcNAc-6P 介導(dǎo)的 AMPK 激活來(lái)拮抗 GSDME 介導(dǎo)的焦亡的新機(jī)制，并表明甘露糖補(bǔ)充劑在減輕化療誘導(dǎo)的副作用中具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

2、OTUD6A對(duì)CDC6的去泛素化促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和化療耐藥性

Mol Cancer. 2024 Apr 29;23(1):86.

摘要

背景：CDC6是一種致癌蛋白，其表達(dá)水平在細(xì)胞周期中波動(dòng)。雖然已經(jīng)鑒定了幾種負(fù)責(zé)泛素介導(dǎo)的CDC6蛋白水解的E3泛素連接酶，但尚未研究CDC6的去泛素化途徑。

方法：采用全蛋白組去泛素化酶（DUB）篩選方法，對(duì)CDC 6的潛在調(diào)控因子進(jìn)行鑒定。進(jìn)行免疫熒光、蛋白質(zhì)半衰期和去泛素化測(cè)定以確定CDC 6的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。進(jìn)行了功能獲得和功能喪失實(shí)驗(yàn)，以分析OUTD 6A-CDC 6軸對(duì)體外腫瘤生長(zhǎng)和化療敏感性的影響。采用N-丁基-N-（4-羥丁基）亞硝胺（BBN）誘導(dǎo)的條件性O(shè)tud 6a基因敲除（CKO）小鼠模型和腫瘤異種移植模型分析OTUD 6A-CDC 6軸在體內(nèi)的作用。使用組織樣本來(lái)確定OTUD 6A和CDC 6之間的關(guān)聯(lián)。

結(jié)果：OTUD 6A通過(guò)去除K6-、K33-和K48-連接的多聚泛素化而與CDC 6相互作用、使CDC 6去聚泛素化并穩(wěn)定化。此外，OTUD 6A通過(guò)上調(diào)CDC 6促進(jìn)細(xì)胞增殖并降低對(duì)化療的敏感性。CKO小鼠不太傾向于BBN誘導(dǎo)的BCa腫瘤發(fā)生，并且OTUD 6A的敲低抑制體內(nèi)腫瘤進(jìn)展。此外，OTUD 6A蛋白水平與CDC 6蛋白水平呈正相關(guān)，并且OTUD 6A和CDC 6蛋白水平高與膀胱癌患者的不良預(yù)后相關(guān)。

結(jié)論：我們揭示了一個(gè)重要但缺失的新DUB管理CDC 6穩(wěn)定性。此外，我們的研究結(jié)果提出了OTUD 6A-CDC 6軸的模型，為細(xì)胞周期和化學(xué)敏感性調(diào)節(jié)提供了新的見(jiàn)解，這可能成為癌癥治療的潛在生物標(biāo)志物和有前途的藥物靶點(diǎn)。

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[1]. Said A, et al. Chloroquine promotes IL-17 production by CD4+ T cells via p38-dependent IL-23 release by monocyte-derived Langerhans-like cells. J Immunol. 2014 Dec 15;193(12):6135-43.
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氯喹機(jī)制明確、活性廣泛，在自噬調(diào)控、抗病毒及腫瘤研究中作用突出，輔以扎實(shí)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與應(yīng)用案例，為相關(guān)領(lǐng)域研究及臨床轉(zhuǎn)化提供重要支撐，具廣闊探索價(jià)值。