采用雙色熒光探針檢測PDX人源細胞比例

PDX模型(人源腫瘤異種移植型，Patient-DerivedtumorXenograft，PDX)是將從癌癥患者身上手術切除的小塊腫瘤植入高度免疫缺陷的小鼠體內(nèi)，腫瘤生長，隨后移植到次級受體小鼠體內(nèi)。目前PDX免疫缺陷小鼠品系主要包括四種：Nude mice、SCID、NOD-SCID、NSG小鼠小鼠，這些小鼠均是免疫缺陷小鼠，缺乏功能性T細胞和/或B細胞的重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠。由于是直接來源于患者的腫瘤組織，這種模型保存了患者自身的特殊表征，保留了腫瘤的微環(huán)境，能夠再現(xiàn)細胞系系統(tǒng)未能捕獲的腫瘤異質(zhì)性，是癌癥機制研究和藥物測試的有用工具。腫瘤開始生長，之后可以取一部分腫瘤組織進行基因測序分析，包括外顯子測序、RNA測序、轉(zhuǎn)錄組測序等，有可能篩選和識別出對患者腫瘤有效的藥物。

但隨著傳代次數(shù)增加，腫瘤組織保真度下降。翼和生物PDX模型質(zhì)控檢測采用雙色熒光探針，雙標準曲線絕對定量qPCR方法檢測PDX模型中人/小鼠細胞的比例，從而快速、高效判斷PDX模型中小鼠細胞的浸潤狀態(tài)。

人與小鼠的雙標準曲線中，隨著PCR反應體系中模板總濃度的變化，lg樣本量與Ct值均成線性關系，線性范圍寬。

每批次檢測，均繪制標準曲線，三個陽性標準品分別3次技術重復，繪制散點圖并添加線性擬合趨勢線，獲得回歸方程，用于小鼠細胞浸潤比例的計算。試劑盒中包含小鼠DNA和人源DNA混合陽性標準品，圖中陽性標準品分別對應小鼠DNA含量為20%、50%和80%。
 
檢測方法有靈敏度高、特異性強、操作方便、穩(wěn)定可靠的優(yōu)勢，適合PDX人源比例檢測的多種應用場景。