Triizol試劑盒的特點及操作步驟

在分子生物學(xué)研究中，RNA提取是非常重要的基礎(chǔ)步驟，而提取效率和純度直接影響后續(xù)實驗的成功。Triizol試劑是一款高效、可靠的核酸提取試劑，為科研人員提供專業(yè)解決方案。

Triizol產(chǎn)品特點：
1、高效提取RNA
Triizol試劑基于經(jīng)典的酸性酚-氯仿分離法，可從細(xì)胞、組織、植物等多種樣本中快速提取高純度的RNA�？蓾M足多種實驗需求，省時高效。

2、高純度
提取的RNA具有極高的純度和完整性，A260/280值通常在1.8-2.0，完全滿足分子生物學(xué)實驗的要求。

3、適用范圍廣
樣本類型：適用于細(xì)胞、組織、細(xì)菌、酵母和病毒等多種樣本。

下游實驗：提取的核酸可直用于Northern，點雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protectionassay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表達(dá)芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的實驗，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

需要的試劑

需要的耗材

操作步驟：
1、細(xì)胞裂解
★ 組織樣本
Triizol用量：每50-100mg組織加1mL Triizol，樣品體積不應(yīng)超過Triizol體積的10％。
（1）將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理；
（2）將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有1mL Triizol的2mL離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上， 待所有的樣品研磨完；
（3）裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體。對于富含蛋白、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結(jié)節(jié)部位等，勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì)，可于4℃ 12,000xg離心10min，然后吸取上清至一新的離心管中。

★ 細(xì)胞樣本
（1）貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，每10cm²培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35mm平皿）加入1mL Triizol，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細(xì)胞完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中；
注：Triizol的使用量應(yīng)由培養(yǎng)皿表面 積決定，而非由細(xì)胞數(shù)目決定。Triizol量不足可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
（2）懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，每5-10×10⁶動植物或酵母細(xì)胞，或每1×10⁷細(xì)菌細(xì)胞加入1mL Triizol， 用加樣器吹打，使其完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。

注：添加Triizol前切勿洗滌細(xì)胞 ，以免RNA降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細(xì)菌或者酵母細(xì)胞。

2、液相分離
（1）裂解產(chǎn)物于室溫放置5min，使核酸-蛋白復(fù)合物完全分離（注：此時樣品可在-80℃長期保存）；
（2）每1mL Triizol加入0.2mL氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s，室溫放置2-3min；
（3）4℃ 12,000xg離心15min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機(jī)相，中間層和無色的上層水相；
（4）吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中，吸取水相的體積為所用Triizol試劑的60％。

3、RNA回收
（1）按照每1mL Triizol的最初使用量加入0.5mL異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置10min；
（2）4℃ 12,000xg離心10min，棄除上清，可見膠狀的RNA沉淀；
（3）按照每1mL Triizol的最初使用量加入1mL 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀；
（4）4℃ 12,000xg離心5min，棄除上清；
（5）室溫倒置5-10min晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機(jī)，以免RNA過干，難以溶解）；
（6）加入適量（如25uL） DEPC-ddH₂O或TE緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解RNA；
（7）通過RNA電泳以及紫外分光光度計檢測，確定RNA的濃度、純度和完整性；
（8）所得的RNA應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

僅需幾步操作，即可得到高質(zhì)量的RNA，簡便且高效。除Triizol(abs60154)外，Absin還有Triizol（總RNA抽提試劑盒）(abs9331)包含有RNA提取全流程的試劑。