RNAprep Pure多糖多酚植物總RNA提取試劑盒操作指南詳細(xì)介紹

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1. 植物樣品（10-20 mg），研缽，液氮
2. 無(wú)水乙醇，β-巰基乙醇
3. 一次性無(wú)菌注射器（DNase I 配置），移液器及配套R(shí)Nase-Free無(wú)菌槍頭, 離心管
4. 通風(fēng)櫥 渦旋振蕩器 金屬浴 低溫離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備-試劑盒準(zhǔn)備1
第一次使用前應(yīng)在漂洗液RW中加入無(wú)水乙醇，加入量請(qǐng)參見(jiàn)瓶上標(biāo)簽。并在加入無(wú)水乙醇后在瓶身做好標(biāo)記。

DNase I 儲(chǔ)存液的配制
將DNase I 干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃ 貯存（可保存9個(gè)月）。
注意：從-20℃ 融化后的DNase I儲(chǔ)存液保存于4℃（可保存6周），不要再次凍存。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備-試劑盒準(zhǔn)備2
（此步驟建議在通風(fēng)櫥內(nèi)操作）
操作前在SL中加入β-巰基乙醇至終濃度為5%，如475 μl SL中加入25 μl β-巰基乙醇。此裂解液最好現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的SL 4℃ 可放置一個(gè)月，裂解液SL在儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)形成沉淀，如果有沉淀出現(xiàn)，請(qǐng)加熱溶解后使用。

操作
Step 1

1、50-100 mg植物葉片在液氮中迅速研磨成粉末
2、加入500 μl SL，立即渦旋混勻（已加入β-巰基乙醇）

Step 2

12,000 rpm(~13,400×g) 離心2 min

Step 3

將上清液轉(zhuǎn)移至過(guò)濾柱CS上(過(guò)濾柱CS放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細(xì)胞碎片沉淀。

Step 4

1、緩慢加入0.4倍上清體積的無(wú)水乙醇，顛倒混勻（此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)沉淀），
2、將得到的溶液和沉淀一起轉(zhuǎn)入吸附柱CR3中
3、12,000 rpm(~13,400×g)，離心15-30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR3放回收集管中。

Step 5

向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I 工作液，室溫放置15 min。

Step 8

將吸附柱CR3轉(zhuǎn)入試劑盒自帶的離心管中，加30–50 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)離心2 min。

洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于30 μl，體積過(guò)小影響回收效率。且RNA應(yīng)保存在-70℃ ，以防降解。

訂購(gòu)信息

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