放線菌酮WB、Cell Viability Assay、IF、RT-PCR實驗參考文獻匯總
Cycloheximide 與真核細胞蛋白質合成過程中核糖體 60S 亞基的 E- 位點結合，阻斷 eEF2 介導的核糖體易位過程并阻止新蛋白質的合成。Cycloheximide 可抑制鐵死亡 (ferroptosis) 并抑制自噬 (autophagy)。
目錄號: HY-12320；Cycloheximide
別名：放線菌酮; Actidione; Naramycin A（https://www.medchemexpress.cn/Cycloheximide.html）
CAS：66-81-9；
01
Cycloheximide 放線菌酮 WB實驗參考文獻
1、Signal Transduct Target Ther. 2024 Mar 8;9(1):63.
用CHX處理的CHRNA 5沉默或過表達ICC細胞中β-連環(huán)蛋白半衰期的基于WB的檢測（2-12 h）。
2、Cell. 2024 Apr 25;187(9):2288-2304.e27.
環(huán)己酰亞胺（0.5μM）阻斷 SLC6A6-KD CD8 + T 細胞中的整體蛋白質合成，包括 ATF4 的合成。
3、Circulation. 2024 May 28;149(22):1752-1769.
用 4-HNE 和 CHX（100μg/mL）處理的 mVSMC 中 Runx2 水平的蛋白質印跡分析長達 12 小時（n = 9）。
02
1、Cell. 2025 Feb 6;188(3):814-831.e21.
環(huán)己酰亞胺（10μM;12 小時）幾乎完全阻斷小鼠胚胎發(fā)育。
2、Circulation. 2024 May 28;149(22):1752-1769.
用 4-HNE 和 CHX（100μg/mL）處理的 mVSMC 中 Runx2 水平的蛋白質印跡分析長達 12 小時（n = 9）。
3、Mol Cancer. 2024 Jul 9;23(1):141.
蛋白質合成抑制劑環(huán)己酰亞胺（20μM）對 PFKP 耗盡的 LIU-LSC-1 細胞中 c-Myc 穩(wěn)定性隨時間推移的影響。蛋白質印跡（左）和半定量（右）對 PFKP 和 c-Myc 穩(wěn)定性的蛋白質表達。
Cycloheximide 放線菌酮 IF實驗參考文獻
1、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.
在 3 h Tg 處理之前，將 HeLa 細胞預處理 1 小時環(huán)己酰亞胺（CHX，10 μg/mL）。IRE1α 簇（紅色）和 G3BP1 陽性 SG（綠色）的代表性共聚焦 IF 圖像。比例尺，10 μm。還顯示了含有共定位 IRE1α-SG 簇的細胞百分比和 IRE1α-SG 簇指數的量化。
2、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.
IRE1α簇（紅色）與 G3BP1（綠色）共定位在用二甲基亞砜（DMSO）對照（Ctrl），Tg（1μM，3 小時），SA（500μM，1 小時）或 HS（43°C，1 小時）處理的 HeLa 細胞中具有代表性的 IF 圖像在沒有或存在 CHX（10μg/mL）預處理的情況下。
Cycloheximide 放線菌酮RT-PCR實驗參考文獻
1、Drug Resist Updat. 2024 Jul 22:76:101120.
環(huán)己酰亞胺（200μg/mL;15 分鐘）。使用 qRT-PCR 檢測 CHX 處理的 AML（THP-1 和 HL-60）細胞中 BCL7A mRNA 的半衰期。
2、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.
在 3 h Tg 處理之前，將 HeLa 細胞預處理 1 小時環(huán)己酰亞胺（CHX，10 μg/mL）。代表性的瓊脂糖凝膠顯示 XBP1 mRNA 剪接水平的 RT-PCR 分析。
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05
體外研究(In Vitro)
Cycloheximide (200µM，2 或 10 分鐘) 在體外抑制 eEF2 介導的 tRNA 易位[1]。
Cycloheximide (35 μM，1 或 4 小時) 抑制兔主動脈平滑肌細胞和 J774A.1 巨噬細胞新生蛋白合成[4]。
Cycloheximide (0.5-1 μg/mL，1-3 天) 抑制 C6 膠質瘤細胞增殖，誘導細胞周期阻滯在 G1 期和 S 期，促進 C6 膠質瘤細胞分化[5]。
注意事項:
1. 傳代次數、細胞狀態(tài)、細胞密度都可能會影響實驗效果。需要調整細胞狀態(tài)至較好時開展實驗 (HCT 116 貼壁細胞形態(tài)較小，密度大時容易聚團，鋪細胞盡量均勻)；
2. 不同細胞系對 Cycloheximide 敏感度不同，檢測指標可能有差異，建議參考文獻，提前做預實驗 (摸索藥物處理時間、濃度，抗體條件)，確定實驗方案合理可行；
3. 藥物現配現用，可超聲加熱助溶，直至溶液澄清透明; 首次實驗用不完時需分裝凍存 -20℃；
4. 檢測指標 MDM2、c-Myc 蛋白出現雙條帶，可能是發(fā)生了翻譯后修飾；
a. c-Myc存在多種翻譯后修飾 (c-Myc 多個位點存在磷酸化修飾、乙�；揎棥⒎核鼗揎�、糖基化修飾)，常出現實際檢測分子量與預測條帶大小不符，或者兩條條帶現象[6]。
b. MDM 2 存在多個磷酸化位點，預測分子量為 55 kDa，但由于存在多種異構體和翻譯后修飾，以及 p53 激活時對 MDM2 有剪切作用，實測分子量大小為 90 kDa，60 kDa，可能觀察到多個條帶[7]。
06
體內研究(In Vivo)
Cycloheximide (30、60 或 120 mg/kg, 在用 200 μA 電擊訓練之前注射）對小鼠記憶測試試驗的潛伏期有顯著影響 (P<0.001)。在鹽水對照中，這種電擊水平導致測試試驗的延遲明顯高于訓練中的延遲。Cycloheximide (30 mg/kg，注射) 導致測試試驗的潛伏期明顯高于鹽水對照組。接受較高劑量注射 Cycloheximide 的小鼠在測試試驗中的潛伏期與鹽水組相當，即在這些條件下較高劑量既不增強也不損害記憶，導致倒 U 型劑量反應曲線用于 Cycloheximide 增強記憶[2]。
Cycloheximide (200 mg/kg, 腹腔注射，KA 給藥前 20 分鐘) 在 Kainic acid (KA) (HY-N2309) 誘導的小鼠海馬原代神經元中抑制細胞外信號調節(jié)蛋白激酶 (p-ERK)、c-Jun N-末端激酶 1 (p-JNK1) 和鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶 II (p-CaMK II) 的磷酸化，以及 c-Fos 和 c-Jun 蛋白表達增加[8]。
