PMA耳部水腫模型：佛波酯使用方法

Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一種佛波酯，是蛋白激酶 C (PKC) 和 SphK 的激活劑。

Phorbol 12-myristate 13-acetate 是 NF-κB 激活劑。Phorbol 12-myristate 13-acetate 可誘導 THP-1 細胞分化 (已經(jīng)經(jīng)過 MCE 專業(yè)的生物實驗驗證)。

目錄號： HY-18739（https://www.medchemexpress.cn/Phorbol-12-myristate-13-acetate.html）；

CAS No. ： 16561-29-8

別名：佛波酯； PMA; Phorbol myristate acetate

Phorbol 12-myristate 13-acetate

01 佛波酯 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 耳部水腫造模方法

Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 可用于構(gòu)建耳部水腫模型[8][9]。

請勿僅參考一篇文章來確定實驗條件。建議在正式實驗前，通過預(yù)實驗確定最佳實驗條件 (動物品系、年齡、劑量、頻率及周期、檢測時間及指標等)。

1. 誘導可預(yù)防型耳部水腫模型[8]

致病原理
PMA 可誘導由蛋白激酶 C (PKC) 介導的明顯炎癥反應(yīng)，特別是激活 PLA2 來引發(fā)炎癥。

具體造模方法：
小鼠：Swiss 小鼠 • 雌性 • 25-30 g
給藥方式：100 μg/mL • 取 20 μL 局部應(yīng)用于單耳 • 單劑量

Note
先給藥后造模 。應(yīng)于 PMA 處理前 1h 給藥抑制劑 Hydroxyachillin。

造模成功指標
外觀監(jiān)測：左右耳厚度差異明顯增大。
指標變化：血管通透性增加。

拮抗產(chǎn)品：Hydroxyachillin; Indomethacin (HY-14397)

2. 誘導可抑制型耳部水腫模型[9]

致病原理
PMA 可誘導由蛋白激酶 C (PKC) 介導的明顯炎癥反應(yīng)，特別是激活 PLA2 來引發(fā)炎癥。

具體造模方法：
大鼠：Wistar • 雄性 • 成年大鼠 • 200-220 g
小鼠：Swiss 白化病 • 雄性 • 25-30 g
給藥方式：局部應(yīng)用于單耳 • 2.5 μg，20 μL • 單劑量

Note
探究抑制型產(chǎn)品的抗水腫作用，應(yīng)在處死小鼠前4小時進行處理。

造模成功指標
外觀監(jiān)測：左右耳質(zhì)量差異明顯增大。
指標變化：刺激巨噬細胞產(chǎn)生超氧陰離子。

相關(guān)產(chǎn)品：Carrageenan (HY-125474); Histamine (HY-B1204); Serotonin (HY-B1473A); Prostaglandin E2 (PGE2) (HY-101952)

佛波酯 Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 耳部水腫造模

參考文獻

[8]. Silván AM, et al. Inhibition by hydroxyachillin, sesquiterpene lactone from Tanacetum microphyllum, of PMA-induced mouse ear oedema. Inflamm Res. 1996 Jun;45(6):289-92.
PMID: 8814460 DOI: 10.1007/BF02280993
[9]. Kaur G, et al. Antiinflammatory evaluation of alcoholic extract of galls of Quercus infectoria. J Ethnopharmacol. 2004 Feb;90(2-3):285-92.PMID: 15013194 DOI: 10.1016/j.jep.2003.10.009

02 PMA誘導 THP-1 細胞孵育分化成巨噬細胞樣細胞 (THP-1 巨噬細胞)

PMA (100, 200 ng/mL；1-5 天) 誘導 THP-1 細胞孵育分化成巨噬細胞樣細胞 (THP-1 巨噬細胞)，從而導致形態(tài)變化，即貼壁樣的巨噬細胞樣表型，且細胞表面 CD11b 表達增加[3][5]。
 
注意事項：
1. THP-1 傾向于高密度生長，需要偏高的密度維持較好的細胞狀態(tài)，一般1:2 半換液或者補液來傳代，少離心，盡量使用高質(zhì)量血清。
2. 傳代次數(shù)、細胞狀態(tài)、細胞密度都可能會影響誘導效果。必要時請調(diào)整細胞狀態(tài)至較好時開展實驗 (細胞形態(tài)飽滿，大小均一，折光性較好， 為懸浮生長單個細胞)。
3. PMA 使用時請注意避光儲存 ，配成 DMSO 母液后分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
4. 如何判斷實驗成功：最直觀的就是細胞由懸浮生長變成貼壁生長。
 
PMA (20 ng/mL，36 小時) 通過激活 PKC-δ/Syk/NF-κB 介導的 Thy-1 上調(diào)來抑制內(nèi)皮細胞遷移[7]。

參考文獻

[3]. Schwende H, et al. Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Leukoc Biol. 1996;59(4):555-561.
[5]. Starr T, et al. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 2018;13(3):e0193601. Published 2018 Mar 14.
[7]. Heng-Ching Wen, et al. PMA inhibits endothelial cell migration through activating the PKC-δ/Syk/NF-κB-mediated up-regulation of Thy-1. Sci Rep. 2018 Nov 2;8(1):16247.

03 誘導 THP-1 細胞分化的 Protocol 有嗎？

(1) 將 THP-1 細胞接種在孔板中 (密度為 5 × 10^5 cells/mL)，加入 PMA (濃度為 50-200 ng/mL)，處理細胞 24 h 以誘導分化。
(2) M0 靜息巨噬細胞的極化在用 PMA 處理細胞 24 h 后，用無血清培養(yǎng)基洗滌分化的貼壁細胞兩次，然后在無 PMA 的培養(yǎng)基中靜置 24 h，以獲得 M0 靜息巨噬細胞。
(3) M1 經(jīng)典激活巨噬細胞的極化在用 PMA 處理細胞 24 h 后，用 100 ng/mL LPS 和 20 ng/mL IFN-γ 共培養(yǎng)細胞 24 h，以獲得經(jīng)典激活的 M1 型巨噬細胞。
(4) M2 替代激活巨噬細胞的極化在用 PMA 處理細胞 24 h 后，用 20 ng/mL IL-4 和 20 ng/mL IL-13 共培養(yǎng)細胞 24 h，以獲得替代激活的 M2 型巨噬細胞。