PMA實(shí)驗(yàn)步驟詳解：PMA佛波酯溶解方法全解析
Phorbol 12-myristate 13-acetate 是 NF-κB 激活劑。Phorbol 12-myristate 13-acetate 可誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞分化(已經(jīng)經(jīng)過 MCE 專業(yè)的生物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證)。Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一種佛波酯，是蛋白激酶 C (PKC) 和 SphK 的激活劑。
目錄號(hào)： HY-18739（https://www.medchemexpress.cn/Phorbol-12-myristate-13-acetate.html）；
CAS：16561-29-8；別名：佛波酯； PMA; Phorbol myristate acetate
01 實(shí)驗(yàn)參考方法
Cell Assay 細(xì)胞檢測(cè)[2]
αT3-1和LβT-2細(xì)胞在37°C、5%CO2的加濕培養(yǎng)箱中的DMEM中單層培養(yǎng)。
血清饑餓是在相同的培養(yǎng)基中用0.1%FCS饑餓16小時(shí)。
然后添加GnRH和PMA，持續(xù)指定的時(shí)間長(zhǎng)度。
通常，αT3-1細(xì)胞通過ExGen 500或通過jetPRIME瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，而LβT2細(xì)胞僅通過jetPRIME轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。
對(duì)于顯性陰性（DN）PKC的實(shí)驗(yàn)，用1.5 μg p38α-GFP與3 μg對(duì)照載體pCDNA 3或3 μg DN-PKC構(gòu)建體轉(zhuǎn)染αT3-1細(xì)胞（在6cm板中）。
對(duì)于LβT2細(xì)胞，用4 μg p38α-GFP沿著9 μg對(duì)照載體pCDNA 3或9 μg DN-PKC構(gòu)建體進(jìn)行轉(zhuǎn)染（在10 cm平板中）。
轉(zhuǎn)染后約30小時(shí)，將細(xì)胞血清饑餓（0.1%FCS）16小時(shí)，隨后用GnRH或PMA刺激，用冰冷的PBS洗滌兩次，用裂解緩沖液處理，然后進(jìn)行一個(gè)凍融循環(huán)。
收獲細(xì)胞;離心（15，000 ×g，15 min，4°C）后，取上清液進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。
Animal Administration 動(dòng)物給藥
老鼠[3]
所有實(shí)驗(yàn)均用雄性Wistar大鼠（體重250-280 g）進(jìn)行。135只Wistar大鼠隨機(jī)分為7組。
(1)假手術(shù)組（n=21）側(cè)腦室注射0.9%生理鹽水：
(2)缺血再灌注組（n=21）在大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）前30 min側(cè)腦室注射0.9%生理鹽水;
(3)甘珀酸（CBX）組（n=21）側(cè)腦室注射甘珀酸
(4)Sch-6783組（n=21）側(cè)腦室注射DZX（2 mM×30 μL）;
(5)5-HD組（n=21）側(cè)腦室注射5-HD（100 mM×10 μL），10 min后，在MCAO前15 min注射DZX;
(6)DZX + Ro組（n=15）側(cè)腦室注射DZX，10 min后，
(7)5-HD+PMA組（n=15）在注射5-HD和DZX后腹腔注射PMA（200 μg/kg）。
參考文獻(xiàn)
[2]. Zhang T, et al. MPTP-Induced Depletion in Basolateral Amygdala via Decrease of D2R Activation Suppresses GABAA Receptors Expression and LTD Induction Leading to Anxiety-Like Behaviors. Front Mol Neurosci. 2017 Aug 7;10:247.
[3]. Schwende H, et al. Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Leukoc Biol. 1996;59(4):555-561.
02 溶解性數(shù)據(jù)
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：
DMSO 中的溶解度 : 100 mg/mL (162.12 mM; 超聲助溶)
Ethanol 中的溶解度 : 100 mg/mL (162.12 mM; 超聲助溶)
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：
請(qǐng)根據(jù)您的 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和給藥方式 選擇適當(dāng)?shù)娜芙夥桨浮?/span>
以下溶解方案都請(qǐng)先按照 In Vitro 方式配制澄清的儲(chǔ)備液，再依次添加助溶劑：
方案 一
請(qǐng)依序添加每種溶劑： 10% DMSO 40% PEG300 5% Tween-80 45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲(chǔ)備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻；再向上述體系中加入 50 μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。
方案 二
請(qǐng)依序添加每種溶劑： 10% DMSO 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: 2.5 mg/mL (4.05 mM); 懸濁液; 超聲助溶
此方案可獲得 2.5 mg/mL的均勻懸濁液，懸濁液可用于口服和腹腔注射。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲(chǔ)備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中，混合均勻。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-環(huán)糊精）粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中，完全溶解至澄清透明。
方案 三
請(qǐng)依序添加每種溶劑： 10% DMSO 90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液，此方案實(shí)驗(yàn)周期在半個(gè)月以上的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)酌情使用。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲(chǔ)備液加到 900 μL玉米油中，混合均勻。
方案 四
請(qǐng)依序添加每種溶劑： 10% EtOH 40% PEG300 5% Tween-80 45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (4.05 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲(chǔ)備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻；再向上述體系中加入 50 μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。
方案 五
請(qǐng)依序添加每種溶劑： 10% EtOH 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: 2.5 mg/mL (4.05 mM); 懸濁液; 超聲助溶
此方案可獲得 2.5 mg/mL的均勻懸濁液，懸濁液可用于口服和腹腔注射。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲(chǔ)備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中，混合均勻。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-環(huán)糊精）粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中，完全溶解至澄清透明。
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