抗體保存避坑指南及適用于IHC實驗的稀釋液配方
我知道你急，但你先別急。
尊敬的 MCE 客戶，當您收到我司抗體時，您將看到：
抗體，常用于高特異性地識別和結合目標分子，從而實現定量分析、細胞標記等功能。不當保存會導致抗體活性下降，降低結合能力，引發(fā)實驗結果不一致，最終浪費時間和經費，還可能得出錯誤的結論，影響科學發(fā)現的進程。
MCE 在線提醒：
1. 及時取件，收到快遞后立即取出，檢查冰袋是否完全融化。
2. 核對產品信息，第一時間閱讀說明書，確認保存條件。
Section.01
抗體保存指南
抗體儲存的“保存期限”長短不一，從數周到數年都有可能，這主要受抗體自身特性的影響�？贵w保存期限也受到儲存條件，如溫度、緩沖液成分等制約。因此：
重要的事情說三遍，先看說明書，必看說明書，一定要看說明書！
不要開蓋，直接離心!
為防止抗體溶液沾在管壁或管蓋上，使用前請勿開蓋，先離心 (約 10,000 ×g) 處理 20-30 s，使附于管蓋或管壁的抗體收集于管底。MCE 保證每管產品的抗體總量達到標示含量。
分裝
反復凍融會使抗體變性，導致抗體形成聚合物，從而降低抗體的結合能力。因此，我們建議分裝儲存——以減少反復凍融造成的損害并防止污染。
首先，分裝適用于大容量抗體，如 50 μL- 100 μL。
其次，分裝成小份時，具體每管分裝的量建議以一次實驗用完為準，且每管分裝體積不低于 10 μL，注意是否需避光環(huán)境。
儲存
抗體儲存是關鍵！妥善保存可保持其活性和穩(wěn)定性，延長其使用壽命，并防止污染。同時可以避免因反復凍融、降解或污染而造成的活性損失，保證抗體能夠精準識別和結合目標抗原，并在實驗中發(fā)揮作用。
儲存須知
Butttt，抗體里可不只有抗體！
當然，每個抗體都有自己獨特的特性，如下表所示，MCE 的研發(fā)團隊根據不同抗體的特性，針對性使用不同緩沖體系，并在此基礎上調整蛋白保護劑的劑量，選擇最合適的防腐劑，加入冷凍保護劑等，以此來實現最大的保留及呈現抗體的最佳性能，助力科研工作：
儲存溫度
接下來就到了我們最最最最重要的抗體儲存工作！很多小伙伴們對溫度很是糾結：4 ℃，?20 ℃，?80 ℃；到底哪個更好些？其實.....
就 MCE 抗體產品來說，常見保存條件如下：
-
對于短期儲存：絕大多數抗體產品在 4°C 可穩(wěn)定保存 1-2 周�？贵w工作液建議當天配制當天使用。
對于長期儲存：絕大多數抗體在 -20°C 下可穩(wěn)定保存 1 年。
對于 MCE 其他特殊類型的抗體，如下表所示：
儲存位置
儲存位置？這.....平時都是冰箱哪有位置放哪里，尤其是冰箱側門架子上，分裝管剛好“站住腳”！
啊啊啊啊啊啊��！施主請自重！萬萬使不得啊~
避雷！
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避免放在門架上或頻繁開關的部位：冰箱門架溫度波動大，同門開冰箱門找東西時可能停留時間較長，造成的溫度變化。
——將抗體存放在冰箱內側靠近后壁的位置，這是溫度最穩(wěn)定的區(qū)域。
-
不要使用無霜冰箱 (自動除霜冰箱)：避雷避雷，無霜冰箱會自動升溫除霜導致抗體被凍融。
總之，影響抗體穩(wěn)定性的因素很多，大家一定要避免多次凍融。
Section.02
抗體搭檔: 稀釋液
當然，當稀釋成工作液，建議當天配制當天使用。
但是自己配的稀釋液總是不如商品化稀釋液好用，比如抗體活性更持久，更不易長菌等。許多用商業(yè)化稀釋液稀釋后的抗體工作液保存一年甚至更久仍然有效，這也是商業(yè)化即用型抗體效期很長的其中一個關鍵原因，即稀釋液配方更科學！
接下來我們拆解一個適用于 IHC 實驗的稀釋液配方：
成分有了，劑量有了，那我們是不是可以自己配了？
且慢，配制操作簡單，但這其中的工藝可大有名堂！
實驗室自制試劑無法保證配制環(huán)境無菌操作、配制批間差不可控等，這些都會直接對抗體性能產生影響。
由此可見，選用工業(yè)化生產的試劑，結果穩(wěn)定性與重復性更高，給實驗減少一部分不確定性。
MCE 提供多種配方的稀釋液，滿足不同的需求：
Section.03
保護盾: 蛋白酶抑制劑
WB 結果如同開“盲盒”？條帶時有時無？若隱若現？有時候可能是因為它！—— 蛋白酶抑制劑：避免你的蛋白被降解。
一起來見證“獵殺”時刻！
使用枯草桿菌蛋白酶 Carlsberg (Subtilisin Carlsberg，SC) 對溶菌酶進行蛋白水解，然后立即添加溶解在二甲基亞砜 (DMSO) 中的 2 mM PMSF 來淬滅反應。
圖 1 顯示 SC 可在反應開始后 10 分鐘內促進溶菌酶完全蛋白水解 。加入蛋白酶抑制劑后，不再觀察到蛋白水解片段，而是在凝膠上清晰地看到一條與天然分子具有相似遷移率的條帶，這表明加入 PMSF 后，蛋白水解的溶菌酶的缺口末端重新連接生成天然形式。
圖 1. 溶菌酶的蛋白水解和再連接反應[1]。
難道是意外？再來測測別的——測試 PMSF 對另一種底物 d-乙內酰脲酶蛋白水解反應的影響。
d-乙內酰脲酶 (d-hydantoinase)：一種來自芽孢桿菌 AR9 的 54 kDa 單體蛋白。在 37 °C 下，以 100:1 w/w 比例的乙內酰脲酶與 SC 在 50 mM Tris pH 8.0 存在下進行蛋白水解，并通過在中間時間點收集等分試樣來監(jiān)測反應進程。最后，通過添加 2-3 mM PMSF 猝滅反應。圖 2 表明，在添加抑制劑后，部分蛋白水解的乙內酰脲酶不再出現碎片化。
圖 2. d-乙內酰脲酶的蛋白水解和再連接反應[1]。
蛋白酶抑制劑通過保護抗體所處“環(huán)境”來間接提高抗體穩(wěn)定性，在抗體制劑中扮演“保護盾”的角色。主要通過阻斷蛋白酶降解途徑來保持抗體完整性和功能，從而提高抗體藥物或診斷制劑的穩(wěn)定性和安全性。
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[1] Sharma A, et al. Serine protease inhibitor mediated peptide bond re-synthesis in diverse protein molecules. FEBS Lett. 2011 Nov 4;585(21):3465-70.
