C25-140作為TRAF6-Ubc13抑制劑的作用機理及在動物模型研究中的應(yīng)用

TRAF6（Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Factor 6）是一種E3泛素連接酶，在先天免疫和炎癥信號通路中起核心調(diào)控作用。其功能實現(xiàn)依賴于與泛素結(jié)合酶Ubc13（一種E2泛素結(jié)合酶，又稱UBE2N）形成復(fù)合物，后者催化形成K63連接的多聚泛素鏈，進而激活下游信號級聯(lián)反應(yīng)。C25-140（AbMole，M13561）通過干擾TRAF6與Ubc13的相互作用，抑制TRAF6的E3泛素連接酶活性，從而阻斷其下游信號通路。AbMole為全球科研客戶提供高純度、高生物活性的抑制劑、細胞因子、人源單抗、天然產(chǎn)物、熒光染料、多肽、靶點蛋白、化合物庫、抗生素等科研試劑，全球大量文獻專利引用。

一、C25-140的作用機理
TRAF6（腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6）屬于TRAF蛋白家族，它在多條細胞信號傳導(dǎo)通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用，包括Toll樣受體（TLRs）、白介素-1受體（IL-1R）、腫瘤壞死因子受體（TNFR）等介導(dǎo)的信號通路。TRAF6通過與Ubc13形成復(fù)合物后，激活自身泛素化活性，再通過泛素化修飾激活下游信號通路，如NF-κB和MAPK通路，從而調(diào)控基因表達，影響細胞的存活、增殖、分化并調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)^[1]。

C25-140（AbMole，M13561）是一種TRAF6-Ubc13蛋白相互作用的高選擇性抑制劑。C25-140通過直接結(jié)合TRAF6的TRAF-C結(jié)構(gòu)域，特異性阻斷TRAF6與Ubc13的相互作用界面，從而抑制TRAF6的E3泛素連接酶活性。這種作用機制不涉及對酶催化中心的直接抑制，而是通過變構(gòu)調(diào)節(jié)破壞蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)。在分子選擇性方面，C25-140對TRAF6-Ubc13相互作用的抑制表現(xiàn)出顯著特異性。在多種E3連接酶篩選中，僅對細胞凋亡抑制蛋白1(cIAP1)表現(xiàn)出輕微交叉反應(yīng)性，而對其他TRAF家族成員(TRAF2/5)或獨立E3連接酶(如MDM2)幾乎無影響。這種選擇性源于C25-140與TRAF6蛋白結(jié)合口袋的精確空間匹配，其中三唑并噠嗪環(huán)與TRAF6的Arg392形成關(guān)鍵氫鍵，而苯甲基哌啶基團則嵌入由Phe473和Tyr470構(gòu)成的疏水腔^[2]。

二、C25-140的科研應(yīng)用
（一）C25-140對炎癥及免疫信號通路的調(diào)控
在多種細胞類型中，C25-140（AbMole，M13561）展現(xiàn)出對炎癥及免疫信號通路的強大調(diào)控能力。在巨噬細胞中，C25-140能夠高效抑制 IL-1β和TNFα 介導(dǎo)的受體信號。當(dāng)巨噬細胞受到IL-1β或TNFα刺激時，會啟動一系列炎癥信號級聯(lián)反應(yīng)，而C25-140的存在可使這些信號通路的關(guān)鍵節(jié)點失活，減少炎癥介質(zhì)的釋放及相關(guān)基因的表達^[3]。在T細胞和B細胞等免疫細胞中，C25-140同樣能夠干擾由抗原或細胞因子激活的免疫信號通路，影響免疫細胞的活化、增殖與分化過程，進一步凸顯其在調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)中的重要作用^[4]。

（二）C25-140在腫瘤研究中的應(yīng)用
TRAF6在多種腫瘤細胞中過表達，并與腫瘤的侵襲性和預(yù)后不良相關(guān)。C25-140（AbMole，M13561）可通過抑制TRAF6的活性，減少PRMT5（Protein Arginine Methyltransferase 5）的甲基化活性，進而抑制腫瘤細胞的增殖。PRMT5是一種II型蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶，其表達異�？蓪�(dǎo)致細胞內(nèi)的表觀遺傳學(xué)修飾發(fā)生變化，并形成腫瘤。C25-140與PRMT5抑制劑聯(lián)合使用，顯示出對乳腺癌細胞系更強的抗增殖效果。這表明C25-140在腫瘤研究中具有潛在的應(yīng)用價值^[5]。2014年，AbMole的兩款抑制劑分別被西班牙國家心血管研究中心和美國哥倫比亞大學(xué)用于動物體內(nèi)實驗，相關(guān)科研成果發(fā)表于頂刊 Nature 和 Nature Medicine。

（三）C25-140在動物模型中的應(yīng)用
1. C25-140用于動物銀屑病模型的研究
在銀屑病的研究中，C25-140 被用于評估其對Imiquimod（IMQ）誘導(dǎo)的銀屑病BALB/c小鼠小鼠模型的抗炎作用。研究中，C25-140通過局部涂抹（每天兩次，每次劑量為1.5 mg/kg），顯著改善了銀屑病的癥狀，包括皮膚厚度、鱗屑和紅斑的減少。此外，C25-140還降低了IL-17等炎癥因子的表達，進一步證明了其在免疫調(diào)節(jié)中的作用^[2]。
2. C25-140用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型的研究
C25-140（AbMole，M13561）也是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）動物模型中的重要科研工具，例如有文獻報導(dǎo)C25-140可用于處理膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）小鼠模型（DBA/1J）。DBA/1J小鼠是一種常用的近交系小鼠，常用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究^[6]。CIA模型是一種廣泛用于研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的動物模型，該模型通過誘導(dǎo)動物產(chǎn)生針對II型膠原的自身免疫反應(yīng)，并在此過程中混合弗氏完全佐劑（Freund′s Adjuvant, Complete）以增強免疫，CIA可以有效模擬RA的特征。結(jié)果顯示經(jīng)C25-140處理的CIA模型小鼠（C25-140的注射劑量為6 mg/kg、10 mg/kg、14 mg/kg，注射方式為皮下注射）顯著降低了關(guān)節(jié)炎指數(shù)，尤其是在10 mg/kg和14 mg/kg劑量下，關(guān)節(jié)炎癥狀幾乎恢復(fù)到基線水平。組織切片顯示，C25-140劑量依賴性地改善了癥狀，包括炎癥和關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)損傷^[7]。并且C25-140處理的小鼠在關(guān)節(jié)組織中顯示出較低的炎癥因子水平，如IL-1β、TNF-α和IL-6等^[7]。
3. C25-140在動物肺損傷模型中的應(yīng)用
C25-140（AbMole，M13561）除了用于自身免疫疾病中的研究，也可用于研究肺損傷及其它急性感染動物模型。在一項研究中，使用了6-8周齡的雄性Sprague Dawley（SD）大鼠（體重180-220 g）來評估C25-140對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的急性肺損傷（ALI）的保護作用。SD大鼠通過氣管內(nèi)注入LPS（5 mg/kg）以構(gòu)建ALI模型，通過腹腔注射給予C25-140（20 μM ）處理^[8]。組織切片結(jié)果表明C25-140處理的大鼠肺組織損傷顯著減輕，表現(xiàn)為肺泡壁增厚、肺泡間隔部分破裂、肺泡結(jié)構(gòu)變形和上皮細胞變性等病理變化的改善，證實C25-140可減輕ALI大鼠模型中的肺組織損傷和炎癥反應(yīng)^[8]。

4. C25-140用于膿毒癥動物模型的研究
C25-140 在一項研究中，對膿毒癥誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠心肌損傷表現(xiàn)出保護作用^[9]。在該研究中，膿毒癥模型是通過腹腔注射大腸桿菌（E. coli）來誘導(dǎo)的。C25-140通過腹腔注射給藥，劑量為5 μM，處理2小時后，再用10 μg/ml LPS（脂多糖） 處理24小時。結(jié)果顯示C25-140顯著減輕了心肌損傷，降低了心肌細胞凋亡率。組織病理學(xué)檢查顯示，C25-140處理的小鼠心肌組織損傷顯著減輕，表現(xiàn)為心肌細胞變性及壞死比例的減少。上述現(xiàn)象的分子機制涉及C25-140對TRAF6和NF-κB p65磷酸化的抑制，最終實現(xiàn)了降低炎癥反應(yīng)的目的效果^[9]。

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參考文獻及鳴謝
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[4] J. Bojarska, W. M. Wolf, Short Peptides as Powerful Arsenal for Smart Fighting Cancer, Cancers 16(19) (2024).
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[9] Y. Li, L. Zhang, P. Zhang, et al., Dehydrocorydaline Protects Against Sepsis-Induced Myocardial Injury Through Modulating the TRAF6/NF-κB Pathway, Frontiers in pharmacology 12 (2021) 709604.