HDAC抑制劑的分類、作用機制及相關藥物研發(fā)策略全解析
一、HDAC
| 類別 | 成員 | 主要定位 | 特點 |
| I類 | HDAC1、2、3、8 | 核內 | 參與細胞周期調控 |
| II類 | HDAC4、5、6、7、9、10 | 核-質轉移 | 與細胞運動、分化相關 |
| III類 | Sirtuins（SIRT1-7） | 依賴NAD+ | 功能廣泛，與衰老、代謝密切相關 |
| IV類 | HDAC11 | 較少研究 | 結構和功能介于I類和II類之間 |
二、HDAC抑制劑
當HDAC異常高表達時，許多抑癌基因被“沉默”，為腫瘤細胞生長提供了便利。HDAC抑制劑通過阻斷HDAC的活性，恢復基因的乙�；剑匦录せ钸@些被壓制的基因，參與調控了很多細胞因子和生物標志物。
| 藥物名稱 | 適應癥 | 特點 |
| 伏立諾他（Vorinostat，SAHA） | 皮膚T細胞淋巴瘤 | 首個FDA批準的HDAC抑制劑 |
| 帕比司他（Panobinostat） | 多發(fā)性骨髓瘤 | 廣譜HDAC抑制劑 |
| 羅米地辛（Romidepsin） | 外周T細胞淋巴瘤 | 天然產物類 |
| 貝利司他（Belinostat） | 稀有T細胞淋巴瘤 | 相對溫和，毒性較低 |
這些藥物主要針對I類和II類HDAC，已經在腫瘤臨床治療中展現出希望。
三、作用機制
From：Wahi, Abhishek & Jain, Priti & Sinhari, Apurba & Jadhav, Hemant. (2023). Progress in discovery and development of natural inhibitors of histone deacetylases (HDACs) as anti-cancer agents. Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. 397. 10.1007/s00210-023-02674-4.
2、細胞因子&生物標志檢測
（1）THUNDER TR-FRET方法
（2）OneStep ELISA細胞因子檢測
OneStep ELISA開發(fā)標簽抗體捕獲技術，板底包被標簽抗體，可高靈敏捕獲雙抗夾心復合物，搭配高特異性重組單抗，一步即可在溶液中形成抗體-分析物夾心復合物。可輕松準確定量蛋白。僅需1h，即可定量細胞因子。
3、信號通路磷酸化蛋白檢測
p-Akt、f NF-B也是由HDAC抑制劑一致調控的細胞因子，一些HDAC抑制劑會降低p-Akt和f NF-B水平。使用均相免洗免疫檢測技術，如TR-FRET，在大分子數據庫中快速篩選潛在候選分子。
（1）THUNDER TR-FRET 磷酸化蛋白檢測
THUNDER TR-FRET時間分辨熒光共振能量轉移，檢測技術靈敏度高，特異性好，重復性好，操作簡單，僅需1~4h。一種基于熒光共振能量轉移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和時間分辨熒光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）的技術，采用夾心法，檢測胞內AKT磷酸化水平和總AKT水平。
用IGF-1處理MCF7細胞（60000個細胞/孔）與IGF-1在室溫下孵育10分鐘。數據顯示，不同酶標儀對信號的影響。用LY294002、Wortmannin和S961處理MCF7細胞（60000個/孔），在室溫下孵育30分鐘，然后用1µM胰島素刺激細胞，在室溫下孵育10分鐘。數據顯示，LY294002和Wortmannin可以抑制AKT蛋白S473位點的磷酸化，而S961則無抑制效果。
（2）WB方法檢測
以Phospho-NF-κB為例
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) 抗體采用1/1000稀釋， HELA細胞100 ng/ml Calyculin A處理30分鐘， TNF-α 20 ng/ml 處理5分鐘，Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP 采用1/10000稀釋，上樣檢測，數據展示如下。
4、殺傷功能檢測——GRANZYME B
HDAC抑制劑可以使Granzyme B增加。
THUNDER Biomarker檢測是基于雙抗體夾心法，標記熒光供體和受體的Granzyme B抗體Eu-Ab1和FR-Ab2，分別與細胞上清中Granzyme B 結合，產生能量共振轉移FRET（615nm），進而產生665nm熒光信號，熒光信號強度與Granzyme B濃度成正比。全程僅需2h，免洗，可高通量。檢測靈敏度高，上限寬。
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| 蛋 白 | ||
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| HDAC1 Protein, Human | UA080412 | 10μg |
| HDAC2 Protein, Human | UA080411 | 10μg |
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| HDAC5 Protein, Human | UA080413 | 10μg |
| HDAC9 Protein, Human | UA080409 | 10μg |
| TNF-α Protein, Human | UA040005 | 10μg |
| 抗 體 | ||
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| HDAC1 mAb | S0B1834 | 100μL |
| CD4 mAb (S-R569) | S0B1165 | 100μL |
| CD8α mAb (SDT-126-8) | S0B2148 | 100μL |
| TR-FRET細胞因子&生物標志物 檢測試劑盒 | ||
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| Human TNFα | KIT-TNFA-500 | 500 points |
| Mouse TNFα | KIT-MTNFA-500 | 500 points |
| Human IFNγ | KIT-IFNG-500 | 500 points |
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| Human VEGF | KIT-VEGF-500 | 500 points |
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| OneStep ELISA細胞因子&生物標志物 檢測試劑盒 | ||
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| Human TNFα | S0C3024 | 96T |
| Mouse TNFα | S0C3023 | 96T |
| Human IFNγ | S0C3025 | 96T |
| Mouse IFNγ | S0C3035 | 96T |
| Granzyme B | S0C3041 | 96T |
| TR-FRET信號通路 檢測試劑盒 | ||
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| Phospho-AKT pan (S473) | KIT-AKTS473P-500 | 500 pionts |
| Phospho-NF-kB (S536) | KIT-NFKBP-500 | 500 points |
| Phospho-ERK1/2 (T202/Y204) | KIT-XTM-ERKP-500 | 500 points |
| Phospho-EGFR (Y1068) | KIT-EGFR-500 | 500 points |
| Total BRD4 | KIT-BRD4T-500 | 500 points |
| Total IRAK4 | KIT-IRAK4-500 | 500 points |
| WB、FACS信號通路 檢測抗體 | ||
| Phospho-Akt (Ser473) mAb | S0B0363 | 100μL |
| Phospho-NF-κB p65 (Ser536) mAb | S0B1035 | 100μL |
| Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) mAb | S0B0902 | 100μL |
| 功能抗體 | ||
| 產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| Invivo anti-human PD-1 | S0B1072 | 1mg |
| Invivo anti-mouse PD-1 mAb | S0B0594 | 1mg |
| Invivo anti-mouse TNFα mAb | S0B1074 | 1mg |
| Invivo anti-mouse CTLA-4 (CD152) mAb | S0B0574 | 1mg |
