蛋白A/G磁珠免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)精選參考文獻(xiàn)

蛋白 A/G 磁珠為 IP、Co-IP 和 ChIP 實(shí)驗(yàn)提供了一種快速便捷的方法。MCE 蛋白質(zhì) A/G 磁珠通常用于從血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清或腹水中分離抗體，以及從細(xì)胞或組織提取物中免疫沉淀和共免疫沉淀抗原。Free Sample (200 μL）限時(shí)可申請(qǐng)?jiān)囉谩Ｄ夸浱?hào)：HY-K0202

1、乳腺癌中細(xì)胞質(zhì)YAP 1介導(dǎo)的ESCRT-III組裝促進(jìn)自噬細(xì)胞死亡并被NEDD 4L泛素化
Cancer Commun (Lond). 2023 May;43(5):582-612.

用0. 5% PBS-Triton X-100洗滌蛋白A/G磁珠四次。然后加入抗體溶液，并將磁珠和抗體在翻轉(zhuǎn)混合器上在25°C下孵育1小時(shí)。將抗體綴合的磁珠用0. 5% PBS-Triton X-100洗滌四次。然后加入制備的蛋白質(zhì)上清液，并將與磁珠綴合的抗體和蛋白質(zhì)在翻轉(zhuǎn)混合器上于4°C溫育2小時(shí)。用0.5% PBS‐Triton X‐100、1 × SDS‐P洗滌后

 
結(jié)果：YAP 1在乳腺癌細(xì)胞中主要表達(dá)于胞漿。胞質(zhì)YAP 1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的自噬性死亡。細(xì)胞質(zhì)YAP 1與ESCRT-III復(fù)合物亞基帶電多泡體蛋白2 B（CHMP 2 B）和液泡蛋白分選4同源物B（VPS 4 B）結(jié)合，促進(jìn)CHMP 2 B-VPS 4 B的組裝并激活自噬體形成。EGCG將YAP 1保留在細(xì)胞質(zhì)中，促進(jìn)CHMP 2B-VPS 4 B的組裝，從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的自噬死亡。YAP 1與NEDD 4L結(jié)合，NEDD 4L介導(dǎo)YAP 1的泛素化和降解。乳腺組織微陣列顯示，高水平的細(xì)胞質(zhì)YAP 1有利于乳腺癌患者的生存。

結(jié)論：胞漿YAP 1通過促進(jìn)ESCRT-III復(fù)合物的組裝介導(dǎo)了乳腺癌細(xì)胞的自噬性死亡，并建立了基于胞漿YAP 1表達(dá)的乳腺癌生存預(yù)測(cè)模型。

2、聯(lián)合放射和ATR抑制劑berzosertib激活STING信號(hào)傳導(dǎo)并通過抑制結(jié)直腸癌中的SHP 1功能增強(qiáng)免疫治療
Cancer Commun (Lond). 2023 Apr;43(4):435-454.

使用含有PMSF和磷酸酶抑制劑混合物的NP 40裂解緩沖液制備細(xì)胞裂解物。將抗SHP 1（1：100）或抗Flag（1：100）與蛋白A/G磁珠在4 ℃下預(yù)混合2 h。
不同治療方案下SHP 1相互作用的STING和TRAF 6的共IP分析

 
結(jié)果：ATRi berzosertib和IR聯(lián)合使用可增強(qiáng)具有不同微衛(wèi)星狀態(tài)的小鼠CRC模型中的CD 8+T細(xì)胞浸潤(rùn)，并增強(qiáng)抗PD-L1治療的療效。機(jī)制研究表明，IR + ATRi可以通過增加胞漿雙鏈DNA水平來激活經(jīng)典的cGAS-STING-pTBK 1/pIRF 3軸，并通過減弱SHP 1介導(dǎo)的對(duì)TRAF 6-STING-p65軸的抑制來激活非經(jīng)典的STING信號(hào)傳導(dǎo)，通過促進(jìn)SHP 1的SUMO化在127位賴氨酸。通過增強(qiáng)STING信號(hào)傳導(dǎo)，IR + ATRi誘導(dǎo)I型干擾素相關(guān)基因表達(dá)和強(qiáng)烈的先天免疫激活，并重振冷腫瘤微環(huán)境，從而促進(jìn)免疫治療。

結(jié)論：ATRi和IR的組合可以通過促進(jìn)具有不同微衛(wèi)星狀態(tài)的CRC模型中的STING信號(hào)傳導(dǎo)來促進(jìn)抗PD-L1治療。本研究所提出的新的組合策略在CRC的管理中值得探討。

3、MAGE-C3通過誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和免疫抑制促進(jìn)食管鱗癌轉(zhuǎn)移
Cancer Commun (Lond). 2021 Dec;41(12):1354-1372.

在有或沒有IFN-γ的KYSE 30細(xì)胞中從毛地黃皂苷裂解物中免疫沉淀法師-C3和IFNGR 1。

 
結(jié)果如下： MAGE-C3在食管鱗癌組織中呈高表達(dá)。MAGE-C3的高表達(dá)與食管鱗癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和生存率相關(guān)。功能實(shí)驗(yàn)表明，MAGE-C3通過激活上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。MAGE-C3抑制抗腫瘤免疫并調(diào)節(jié)T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌，這意味著免疫抑制功能。從機(jī)制上講，MAGE-C3通過與IFN-γ受體1（IFNGR 1）結(jié)合并加強(qiáng)IFNGR 1與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1（STAT 1）之間的相互作用，促進(jìn)IFN-γ信號(hào)傳導(dǎo)并上調(diào)程序性細(xì)胞死亡配體1（PD-L1）。有趣的是，MAGE-C3在免疫活性小鼠中比在免疫缺陷裸鼠中顯示出更高的腫瘤發(fā)生，證實(shí)了MAGE-C3的免疫抑制作用。此外，攜帶MAGE-C3過表達(dá)腫瘤的小鼠表現(xiàn)出更差的存活率和更多的肺轉(zhuǎn)移，其中CD 8+浸潤(rùn)的T細(xì)胞減少，程序性細(xì)胞死亡1（PD-1）+CD 8+浸潤(rùn)的T細(xì)胞增加。

結(jié)論： MAGE-C3通過促進(jìn)EMT和保護(hù)腫瘤免受免疫監(jiān)視而增強(qiáng)腫瘤轉(zhuǎn)移，可能成為潛在的預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。

4、生酮飲食通過賴氨酸β-羥丁�；�重塑癌癥代謝
Nat Metab. 2024 Aug;6(8):1505-1528.

蛋白A/G磁珠（50 μL; 2 h）。免疫印跡顯示來自喂食對(duì)照飲食或KD 5周的雄性小鼠的肝臟中ALDOB的Kbhb或Kac。用來自小鼠肝全細(xì)胞裂解物的泛Kbhb或泛Kac抗體進(jìn)行免疫沉淀。

 
賴氨酸β-羥基丁�；�（Kbhb）是由生酮飲食（KD）誘導(dǎo)的翻譯后修飾，KD是一種對(duì)多種人類疾病具有治療作用的飲食。很少有人知道細(xì)胞過程是如何調(diào)節(jié)Kbhb。在這里，我們通過對(duì)小鼠肝臟的多組學(xué)分析表明，蛋白Kbhb受到KD的強(qiáng)烈影響。使用具有已知功能的小訓(xùn)練數(shù)據(jù)集，我們開發(fā)了一種用于預(yù)測(cè)功能重要的賴氨酸修飾位點(diǎn)（pFunK）的生物信息學(xué)方法，該方法揭示了各種蛋白質(zhì)上功能相關(guān)的Kbhb位點(diǎn)，包括醛縮酶B（ALDOB）Lys 108。肝細(xì)胞癌細(xì)胞中KD消耗或β-羥基丁-酸補(bǔ)充增加ALDOB Lys 108 bhb并抑制ALDOB的酶活性。Kbhb模擬突變（p.Lys108Gln）減弱ALDOB活性及其與底物果糖-1，6-二磷酸的結(jié)合，抑制雷帕霉素信號(hào)傳導(dǎo)和糖酵解的哺乳動(dòng)物靶標(biāo)，并顯著抑制癌細(xì)胞增殖。我們的研究揭示了Kbhb在調(diào)節(jié)癌細(xì)胞代謝中的關(guān)鍵作用，并提供了一個(gè)普遍適用的算法來預(yù)測(cè)功能上重要的賴氨酸修飾位點(diǎn)。

5、去整合素和金屬蛋白酶22通過其去整合素結(jié)構(gòu)域激活整合素β1促進(jìn)垂體腺瘤的進(jìn)展
Neuro Oncol. 2024 Jan 5;26(1):137-152.

將上清液用與蛋白A/G磁珠預(yù)結(jié)合的抗體免疫沉淀。
GH 3和AtT 20細(xì)胞中ADAM 22和ITGB 1之間的Co-IP。

 
結(jié)果：ADAM 22在PA細(xì)胞中過表達(dá)，并能促進(jìn)PA細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。ADAM 22與整合素β1（ITGB 1）相互作用，通過去整合素結(jié)構(gòu)域激活FAK/PI 3 K和FAK/ERK信號(hào)通路，促進(jìn)PA的進(jìn)展。ADAM 22被PKA磷酸化并募集14-3-3，從而延遲其降解。ITGB 1靶向抑制劑（anti-itgb 1）與生長(zhǎng)抑素類似物或多巴胺激動(dòng)劑聯(lián)合治療PA具有抗腫瘤作用和協(xié)同作用。

結(jié)論：PA中ADAM 22表達(dá)上調(diào)，并通過激活I(lǐng)TGB 1信號(hào)通路促進(jìn)PA增殖、遷移和侵襲。PKA可能通過轉(zhuǎn)錄后修飾水平調(diào)控ADAM 22的降解。ITGB 1可能是PA潛在的治療靶點(diǎn)。

6、Cell Mol Immunol. 2023 Mar;20(3):292-304.

用IL-17 A（100 ng/ml）處理的HaCaT細(xì)胞中抗FXYD 3或TRAF 3抗體的蛋白免疫沉淀（IP）的免疫印跡分析。

 
7、Cell Res. 2025 Mar;35(3):165-185.

Raptin與下丘腦GT 1 -7神經(jīng)元中GRM 3 VFT或GRM 3跨膜結(jié)構(gòu)域（TMD）之間結(jié)合的免疫沉淀（IP）分析。將具有人GRM 3-VFT或人GRM 3-TMD過表達(dá)的下丘腦GT 1 -7神經(jīng)元的細(xì)胞裂解物與PBS或His-Raptin孵育。

 
8、Cancer Commun (Lond). 2024 Dec;44(12):1391-1413.

蛋白A/G磁珠（4 h）。通過co-IP試驗(yàn)檢測(cè)LMP 1-GFP和阿利克斯-MYC之間的相互作用。

 
9、Signal Transduct Target Ther. 2024 Sep 26;9(1):253.

蛋白A/G磁珠（30 μL）在4 ℃下與抗體和裂解緩沖液偶聯(lián)。隨后，將蛋白質(zhì)樣品與預(yù)綴合的珠在4 °C下在旋轉(zhuǎn)輪上孵育過夜。
GRP 75、ANT 2和UCP 1的免疫共沉淀。用Myc-GRP 75、ANT 2和Flag-UCP 1共轉(zhuǎn)染HEK 293 T細(xì)胞。用針對(duì)Myc-標(biāo)簽或Flag-標(biāo)簽的抗體免疫沉淀蛋白質(zhì)提取物，然后用指定的抗體進(jìn)行免疫印跡。

 
本文內(nèi)容基于 MCE 的 蛋白A/G磁珠產(chǎn)品資料整理而成，歡迎查閱瀏覽（www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/protein-a/g-magnetic-beads.html）