AAV遞送快速誘導(dǎo)VS基因編輯人源化的應(yīng)用比較

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)，其特征是脂質(zhì)在動(dòng)脈內(nèi)膜沉積引發(fā)慢性炎癥，最終導(dǎo)致斑塊形成和血管功能障礙。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的異常積累是AS的核心驅(qū)動(dòng)因素，而PCSK9通過降解肝細(xì)胞表面的LDL受體（LDLR），顯著抑制LDL-C的清除，從而加速AS進(jìn)程。

為滿足不同研究階段對(duì)PCSK9模型時(shí)效性和臨床相關(guān)性的差異化需求，賽業(yè)生物構(gòu)建了AAV遞送PCSK9誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化模型及B6-hPCSK9全基因組人源化模型。

AAV遞送PCSK9誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化模型

通過AAV病毒遞送PCSK9基因以快速誘導(dǎo)高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，該模型利用AAV的肝靶向特性高效轉(zhuǎn)導(dǎo)肝細(xì)胞，過表達(dá)PCSK9蛋白，進(jìn)而抑制LDLR循環(huán)，導(dǎo)致血漿LDL-C水平顯著升高，并協(xié)同高脂飲食（如Western diet）加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。

• 快速誘導(dǎo)：2周出現(xiàn)血生化表型，現(xiàn)貨小鼠造模成功率達(dá)100%
• 靈活性高：多種病毒血清型、啟動(dòng)子或突變型PCSK9可選
• 節(jié)約成本：無需復(fù)雜育種，適用于PCSK9抑制劑或抗體驗(yàn)證等藥效評(píng)估
• 兼容性強(qiáng)：適配不同遺傳背景小鼠，可與高脂飲食聯(lián)用以加速病變進(jìn)程

B6-hPCSK9全基因組人源化模型

通過基因編輯技術(shù)將小鼠Pcsk9基因序列全部替換為人類PCSK9基因序列，獲得表達(dá)人源PCSK9蛋白，模擬人體內(nèi)源性調(diào)控機(jī)制。

• 臨床相關(guān)性高：保留人類PCSK9基因的天然調(diào)控序列
• 穩(wěn)定遺傳：PCSK9人源化特性可穩(wěn)定傳代
• 安全可靠：規(guī)避免疫反應(yīng)或外源基因過表達(dá)導(dǎo)致的非特異性效應(yīng)
• 多疾病關(guān)聯(lián)：適用于脂代謝調(diào)控、神經(jīng)退行性疾病、腫瘤免疫等研究

PCSK9模型驗(yàn)證數(shù)據(jù)

AAV-mPCSK9(D377Y)小鼠

PCSK9蛋白水平檢測(cè)

Western diet飲食飼養(yǎng)28天后，與生理鹽水組比AAV-mPCSK9(D377Y)注射組小鼠血漿中mPCSK9的表達(dá)含量顯著升高，肝臟組織中LDLR蛋白表達(dá)含量顯著降低。

血生化檢測(cè)結(jié)果

Western diet飲食飼養(yǎng)28天后，與生理鹽水組比AAV-mPCSK9(D377Y)注射組小鼠血漿中T-Chol (總膽固醇)、TG (甘油三酯)、LDL (低密度脂蛋白)含量顯著升高，HDL (高密度脂蛋白)含量顯著降低。

B6-hPCSK9小鼠
1、人源PCSK9基因和蛋白表達(dá)水平

B6-hPCSK9小鼠和C57BL/6野生型（WT）小鼠不同組織中人源PCSK9基因和蛋白表達(dá)水平

2、依洛尤單抗（Evolocumab）藥效驗(yàn)證

依洛尤單抗（Evolocumab）藥效驗(yàn)證方案及結(jié)果

注射Evolocumab后，B6-hPCSK9+WD組小鼠血清LDL-C較WT+WD組小鼠降低。Evolocumab注射5天后，B6-hPCSK9+WD小鼠血清人源PCSK9水平未見顯著性下降。這與依洛尤單抗的作用機(jī)制理論預(yù)期相符。

3、英克司蘭（Inclisiran）藥效驗(yàn)證

注射Inclisiran后，B6-hPCSK9+WD組小鼠的血清LDL-C水平較WT+WD組小鼠有所降低

B6-hPCSK9+WD給藥組小鼠在注射Inclisiran后第19天，其血清人源PCSK9水平顯著降低，表明Inclisiran有效抑制了人源PCSK9蛋白的合成。在Inclisiran注射19天后，B6-hPCSK9+WD給藥小鼠的肝臟PCSK9水平顯著下降，表明Inclisiran有效抑制了肝臟PCSK9蛋白的合成。