ELISA試劑盒檢測方法淺析
ELISA的檢測方法有直接法、間接法、競爭法基雙抗夾心法，其中直接法和競爭法應(yīng)用較少，應(yīng)有最多的是雙抗夾心法，其在敏感性基因特異性上有明顯的優(yōu)勢。
直接法
將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測抗原。
相較于其他類型的ELISA實(shí)驗(yàn)，直接ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，檢測結(jié)果不容易出錯，但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會與ELISA版結(jié)合，實(shí)驗(yàn)背景會比較高，而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實(shí)驗(yàn)不太靈活。另外由于沒有使用二抗，信號沒有被放大，降低了測定的靈敏度。
間接法
將抗原固定于ELISA班上，隨后分兩步進(jìn)行檢測：首先加入檢測抗體于抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)二抗檢測并利用底物顯色。
于直接ELISA相比，間接ELISA用到酶標(biāo)二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標(biāo)記抗體，更經(jīng)濟(jì)，間接ELISA還提供了更大的靈活性，
缺點(diǎn)：存在交叉反應(yīng)的可能性（酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合），可能會增加背景，同時與直接ELISA相比，間接ELISA實(shí)驗(yàn)多了二抗孵育的步驟，實(shí)驗(yàn)周期延長。
夾心法
ELISA實(shí)驗(yàn)雙抗夾心法原理：
1.包被：抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反應(yīng)等免疫活性。
2、標(biāo)記：抗原或者抗體可通過共價鍵與酶連接成酶結(jié)合物而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn)。
3、顯色：酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或抗體結(jié)合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者抗體的相對含量。
被檢測的抗原包被再兩個抗體之間其中一個抗體將抗原固定于載體上，即捕捉抗體，另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測定抗原的量，或不標(biāo)記，再透過酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量，這兩種抗體必須小心選取，才可以避免交互反應(yīng)貨競爭相同額抗原結(jié)合部位。
競爭法
預(yù)先將抗原包被再固相載體上，并加入酶標(biāo)記的特異性抗體，實(shí)驗(yàn)是，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原于預(yù)先包被再固相載體上的抗原競爭結(jié)合酶標(biāo)抗體，如果待檢測物是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標(biāo)抗體競爭結(jié)合包被再固相載體上的抗原，通過洗滌洗掉被競爭結(jié)合的酶標(biāo)抗體，最后加底物顯色，需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比競爭ELISA相對以上的三種方法更復(fù)雜一些，但以上三種ELISA類型都適用于競爭ELISA的形式，其主要有點(diǎn)在于可檢測不純的樣品，且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高，但存在整體敏感性和專一性較差的問題。
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