實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果闡述

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time quantitative PCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

熒光定量PCR以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)成為了分子生物學(xué)研究中的重要工具，目前已得到廣泛應(yīng)用（如轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物檢測(cè)、RNAi基因失活率檢測(cè)、病原微生物或病毒含量檢測(cè)、基因差異表達(dá)、基因分型）。

基線在PCR擴(kuò)增反應(yīng)的最初數(shù)個(gè)循環(huán)里，熒光信號(hào)變化不大，接近一條直線，這樣的直線即基線。光域值threshold的設(shè)定，一般將PCR反應(yīng)前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)，熒光域值是PCR3-15個(gè)循環(huán)熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)差的10倍，熒光域值設(shè)定在PCR擴(kuò)增的指數(shù)期。

CT值表示每個(gè)PCR反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，各模板的CT值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，CT值越小，反之亦然。

融解曲線是用來(lái)驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性的，如果產(chǎn)物是單一條帶，融解曲線就會(huì)出現(xiàn)一尖峰；如果有引物二聚體或其它非特異性擴(kuò)增，就會(huì)出現(xiàn)至少兩個(gè)尖峰。