解讀ELISA試劑盒檢測標本對實驗的影響

ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法靈敏，特異性強不需要特殊設(shè)備，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外，有時常可見到一些錯誤結(jié)果（即假陽性或假陰性）；本司在這里為大家解讀下ELISA試劑盒檢測的影響因素中標本的影響。

1.  溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。

可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴重溶血標本禁用。

2. 標本受細菌污染。

因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
 
3.  標本保存不當。

在冰箱中保存過久的標本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃，1周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強烈振蕩。

4. 塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

好使用真空采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。

5. 標本凝固不全。

在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。