兼具逆轉(zhuǎn)錄和聚合酶兩種活性的酶， 您見過嗎 ？

大家有沒有在火車站等核酸報(bào)告的經(jīng)歷？火車要開了， 報(bào)告沒有出來， 傻傻等待核酸結(jié)果中！抓狂的內(nèi)心呼喊： 核酸報(bào)告怎么還沒有出來？？？

 Volcano3G®， 以新冠為例，可以把常規(guī)2小時(shí)的檢測(cè)時(shí)間可以縮短為半個(gè)小時(shí)！

心動(dòng)了嗎？ 心動(dòng)的話， 咱往下看詳細(xì)內(nèi)容， 我們言歸正傳，慢慢寫： 

對(duì)于RNA樣本檢測(cè)，常規(guī)傳統(tǒng)的一步法檢測(cè)，需要依賴于單獨(dú)的逆轉(zhuǎn)錄酶先進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄、完成cDNA合成后，再啟動(dòng)DNA聚合酶活性、進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增環(huán)節(jié)，整個(gè)反應(yīng)過程耗時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)，需要雙酶協(xié)同工作，對(duì)于體系優(yōu)化具有一定挑戰(zhàn)。

Medix Biochemica重磅推出雙功能重組酶預(yù)混試劑——Volcano3G®，具有高達(dá)95℃的熱穩(wěn)定性，兼具逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性，實(shí)現(xiàn)零步RT-PCR、粗樣本直擴(kuò)檢測(cè)。

兼具逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性

Volcano3G®預(yù)混試劑中，采用的工程化重組Taq DNA聚合酶，兼具逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶活性，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成和DNA擴(kuò)增，真正實(shí)現(xiàn)零步法RT-PCR檢測(cè)。

Volcano3G®中使用的兼具逆轉(zhuǎn)錄酶活性的雙功能 Taq DNA聚合酶，適用于RNA和/或DNA模板的檢測(cè)(藍(lán)色實(shí)線 、黃色實(shí)線  )，而普通Taq DNA聚合酶，僅適用于針對(duì)DNA模板的擴(kuò)增檢測(cè)(黃色虛線)，不能進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄(藍(lán)色虛線)。

引用文獻(xiàn)：Johannes W. P. Kuiper, Timo Baade, et al. Detection of SARS-CoV-2 from raw patient samples by coupled high temperature reverse transcription and amplification. PLoS One. 2020 Nov 2;15(11):e0241740.

零步法RT-PCR檢測(cè)，縮短反應(yīng)時(shí)間，支持粗樣本直擴(kuò)
Volcano3G®基于適配體修飾熱啟動(dòng)酶配方，支持在高溫條件下即時(shí)啟動(dòng)循環(huán)，無需單獨(dú)的樣本提取步驟，實(shí)現(xiàn)粗樣本直接擴(kuò)增，并且在雙功能工程化酶的作用下，極大程度縮短檢測(cè)時(shí)間。

Volcano3G®快速零步法 RT-PCR，相較于傳統(tǒng)一步 RT-PCR，節(jié)省了15+5 min單獨(dú)逆轉(zhuǎn)錄和預(yù)變性過程，極大程度縮短了檢測(cè)時(shí)間。

高達(dá)95℃真正耐高溫的雙功能酶

Volcano3G®熱穩(wěn)定性高達(dá)95℃。在45~95℃溫度范圍依然保持高效的RNA逆轉(zhuǎn)錄和DNA擴(kuò)增效率。較高的逆轉(zhuǎn)錄溫度有助于減少靶基因中形成的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，提高引物特異性，從而提高擴(kuò)增效率。

實(shí)驗(yàn)組：Volcano3G®、供應(yīng)商B和供應(yīng)商C試劑，于45~95℃加熱15min后，用于SCV2為樣本的RT-qPCR檢測(cè)，得到Cq(實(shí)驗(yàn)組)。
對(duì)照組：以SCV2為樣本，分別使用Volcano3G®、供應(yīng)商B和供應(yīng)商C試劑進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，得到Cq(對(duì)照組)。

根據(jù)Cq(對(duì)照組)- Cq(實(shí)驗(yàn)組)得到的ΔCq值，可以看出供應(yīng)商B和供應(yīng)商C(綠色、橙色)經(jīng)過高溫處理后，增加的ΔCq表明在恒定模板量前提下發(fā)生延遲或沒有擴(kuò)增，而Volcano3G®(黑色)經(jīng)過高溫后依然保持高效酶活性，具有更優(yōu)的熱穩(wěn)定性。