免疫沉淀及免疫共沉淀

一、服務(wù)內(nèi)容
1、溫和條件下進(jìn)行蛋白抽提，BCA定量，調(diào)整蛋白濃度
2、樣品預(yù)處理：用Protein A/G Sepharose孵育（進(jìn)行WB驗證可以免此步驟）
3、樣品與IP抗體進(jìn)行孵育，之后加入Protein A/G-Agarose進(jìn)行孵育
4、洗滌Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并對免疫復(fù)合物進(jìn)行變性處理
5、沉淀產(chǎn)物SDS—PAGE或者WB鑒定，質(zhì)譜鑒定由客戶自行確定
6、Western blot檢測
（1） 電泳：聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白樣品
（2） 濕法轉(zhuǎn)�。˙LOTING：Tank Transfer）
（3） 雜交：用抗體鑒定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）
（4） 化學(xué)發(fā)光檢測（ECL），膠片曝光
7、預(yù)實驗及正式實驗服務(wù)
二、樣品要求（樣品處理及保存見附件）
1. 細(xì)胞＞1×10⁷；組織＞100mg；細(xì)菌濕重＞1mg；植物＞100mg；血清＞50ul
2. 樣品蛋白濃度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/樣品
三、收費標(biāo)準(zhǔn)

服務(wù)項目	收費標(biāo)準(zhǔn)￥	實驗周期
免疫沉淀	7500/基因	3-4周
免疫共沉淀	8300/基因	3-4周

四、客戶提供材料
1、新鮮或正確保存的樣品
2、目的蛋白一抗，空白或者陰性同種屬IgG
3、陽性對照樣品（盡量提供）
4、相關(guān)文獻(xiàn)（可選）
五、提交給客戶結(jié)果
1、預(yù)實驗曝光結(jié)果（膠片及掃描圖），預(yù)實驗采取2個一抗稀釋度
2、正式實驗曝光結(jié)果（膠片及掃描圖）
3、完整實驗報告
4、IOD值分析報告（可選）
六、服務(wù)說明
1、待檢測樣品可以是待檢測蛋白樣品，也可以是細(xì)胞、組織等其他樣品
2、免疫沉淀用抗體
3、檢測用抗體
4、特異性二抗
七、對照設(shè)置：由客戶提供
1、空白：無抗體，只有protein A/G
2、陰性對照：無蛋白，有抗體及protein A/G
3、陰性對照：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞或者基因敲除樣品
4、對應(yīng)的無關(guān)空白抗體: Normal IgG
5、蛋白裂解液上清：Input