小鼠基因敲除/敲入服務(wù)

國家遺傳工程小鼠資源庫（NRCMM）暨南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所（MARC）是中國最大的遺傳工程小鼠資源庫。 除了擁有500多種小鼠品系外，我們從2005年開始，對外提供基因工程改造小鼠的定制服務(wù)，包括轉(zhuǎn)基因（TG）和敲除/敲入（KO/KI）服務(wù)。 其中敲除/敲入服務(wù)又包括全身性敲除（Conventional KO）、條件性敲除（Conditional KO）、點(diǎn)突變敲入（Target Mutation KI）以及人源化（Humanised） 小鼠的制作以及更為復(fù)雜的多次打靶小鼠的制作。

我們負(fù)責(zé)打靶基因的文獻(xiàn)調(diào)研，根據(jù)您的需求量身定制所需要的打靶小鼠，并進(jìn)行相應(yīng)的評估，最大限度的節(jié)約您的時(shí)間和降低風(fēng)險(xiǎn)，得到您滿意的特制小鼠模型。

我們的流程包括打靶載體設(shè)計(jì)、ES cells打靶、囊胚注射、小鼠繁育、遺傳鑒定以及胚胎冷凍，小鼠定制服務(wù)靈活多變，可以隨意選擇您所需要的服務(wù)，您可以自行提供打靶載體（要求見轉(zhuǎn)基因小鼠）以及已經(jīng)打靶完成的ES cells等，我們可以繼續(xù)幫您完成后續(xù)操作。

定制流程：
1. 打靶載體設(shè)計(jì)
在確定方案后，我們會完成打靶載體的構(gòu)建
在條件型敲除（Conditional KO）策略中，我們會利用同源重組技術(shù)。KO First與Conditional KO有相似之處，KO Firs是在Neomycin標(biāo)記位置的元件更為復(fù)雜，是一個(gè)帶有剪接受體位點(diǎn)的LacZ和Neomycin的合并體。這樣，Neomycin作為篩選標(biāo)記，功能與上述Conditional KO中一致，LacZ就能夠作為reporter在目的基因的promoter啟動(dòng)下，與目的基因一同表達(dá)，可以方便地對目的基因的表達(dá)進(jìn)行定位。同樣，與Flpe表達(dá)品系交配可以刪除LacZ-neo標(biāo)記，轉(zhuǎn)變成常規(guī)的Conditional KO的flox小鼠。

基因敲入(Knock In)是指在需要操作區(qū)域定制突變或則將外源基因整合進(jìn)入此區(qū)域。例如在需要操作基因區(qū)域?qū)⒁恍┨囟ǖ腄NA片段或者某些報(bào)告基因(如EGFP、dsRed、LacZ等)通過同源重組的方式整合進(jìn)入特定的基因區(qū)域，使操作基因區(qū)域發(fā)生突變或者帶上某種報(bào)告基因的標(biāo)記，進(jìn)而對其進(jìn)行研究。

2.ES cells 打靶：
之后我們會完成ES電轉(zhuǎn)和陽性克隆篩選（PCR和Southern篩選），目前我們可以提供的ES細(xì)胞背景為C57BL/6或129S6，如果有特殊背景需要，請聯(lián)系詢問。

3. 囊胚注射：
打靶之后完成顯微囊胚注射

4. 遺傳鑒定：
最后對得到的小鼠進(jìn)行鑒定，得到陽性嵌合小鼠，對陽性小鼠進(jìn)行可遺傳性檢測，得到雜合子小鼠，最終向客戶提供至少4只基因敲除的F1雜合子小鼠。

5. 胚胎冷凍：
我們將為您提供兩年的此小鼠免費(fèi)胚胎冷凍服務(wù)，隨時(shí)為您提供此小鼠活體，不必?fù)?dān)心您寶貴小鼠模型的丟失，以保證您能順利進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。


請聯(lián)系我們的相關(guān)項(xiàng)目經(jīng)理

張明坤（項(xiàng)目經(jīng)理）  電話：025-58641571
高天蕓（項(xiàng)目經(jīng)理）  電話：025-58641543
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