Qubit技術在NGS實驗中的重要性介紹及其與傳統(tǒng)紫外分光光度計的區(qū)別

“又失敗了！”實驗室里傳來一聲嘆息。
小王看著手中的NGS測序數(shù)據，文庫構建的濃度明明符合標準，為什么測序結果卻總是不理想？同樣的樣本，同樣的流程，問題究竟出在哪里？
導師走過來看了一眼：“你用的什么定量方法？”
“Nanodrop啊，260/280比值很好，濃度也夠。”
“問題可能就出在這里，”導師搖搖頭，“NGS樣本檢測，你得用Qubit。”
 

傳統(tǒng)方法的“盲區(qū)”
在NGS實驗全流程中，樣本質量檢測是決定成敗的第一步。許多實驗室習慣使用紫外分光光度計（如Nanodrop）進行核酸定量，這種方法快速簡便，但有一個致命缺陷：

它無法區(qū)分DNA、RNA、核苷酸和雜質！

紫外分光光度計通過檢測260nm處的吸光度來推算核酸濃度，但溶液中的游離核苷酸、降解的核酸片段、蛋白質殘留等都會吸收260nm的光，導致濃度被高估。這種“虛假繁榮”會讓后續(xù)的文庫構建基于錯誤的濃度計算，最終導致測序數(shù)據質量差、覆蓋度不均。

Qubit技術：分子級別的“精準探測”
Qubit熒光定量儀采用完全不同的原理，它就像給每個目標分子貼上了“專屬熒光標簽”：
1. 特異性熒光染料：
Qubit使用與核酸特異結合的熒光染料，這些染料只有對應結合到雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA的其中一種上時才會發(fā)出熒光

2. 絕對定量：
通過已知濃度的標準品建立標準曲線，直接計算樣本中的核酸分子數(shù)量

3. 超高靈敏度：
可檢測低至10pg/μL的微量樣本，比傳統(tǒng)方法敏感1000倍以上

為什么NGS必須使用Qubit？

1. 微量樣本的“守護者”
NGS實驗中，尤其是臨床樣本、單細胞測序等場景，起始材料往往極其有限。Qubit能夠準確測量納升級別的微量樣本，確保每一份珍貴樣本都被合理利用。

2. 文庫定量的“黃金標準”
文庫構建后，準確知道有多少接頭連接的片段至關重要。Qubit可以特異性檢測雙鏈DNA，排除游離引物、接頭二聚體的干擾，確保上機測序的濃度真實可靠。

3. 質量控制“第一道防線”
Qubit提供精準DNA濃度檢測，異常的測量值往往是樣本質量預警信號。

貼心提示：

• 不同核酸類型選擇對應試劑盒（dsDNA、RNA、ssDNA等）
• 劇烈震蕩可能引起熒光淬滅，輕柔混勻即可
• 注意試劑保存條件，避免反復凍融

超越定量的價值
在現(xiàn)代NGS實驗室，Qubit已不僅是定量工具，更是全流程質量控制體系的核心環(huán)節(jié)。它提供的精準數(shù)據支撐著：
1. 樣本準入決策：是否繼續(xù)后續(xù)實驗
2. 實驗條件優(yōu)化：酶切時間、PCR循環(huán)數(shù)調整
3. 成本效益平衡：避免過度測序或測序不足
4. 結果可重復性保障：不同批次實驗間的標準化

基因組學到轉錄組學，Qubit以其無可替代的精準性，守護著每一個NGS實驗的起點。在追求“精準醫(yī)學”的今天，我們比任何時候都更需要從源頭確保數(shù)據的真實可靠。

精準，從來不只是口號。在NGS的世界里，它始于樣本進入儀器的第一刻，始于那個小小的Qubit檢測管中。

精準檢測，從“Q”開始。

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