快速流式細(xì)胞儀助力外周血單核細(xì)胞與進(jìn)行性青光眼性視力喪失的研究

青光眼是一種慢性進(jìn)行性的視神經(jīng)疾病，預(yù)計(jì)到2030年全球青光眼患者將增至約 8000 萬(wàn)，其主要病理表現(xiàn)為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGC ）死亡導(dǎo)致視力喪失。高眼壓（IOP）和高齡是最重要誘因，而降眼壓治療做為目前唯一有效的干預(yù)措施，治療后仍有大量患者（60% 歐洲裔和 90% 亞洲裔）出現(xiàn)視力惡化。多項(xiàng)研究指出，線粒體能量代謝異常和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）水平下降可能與青光眼發(fā)病及進(jìn)展相關(guān)，但尚無(wú)明確顯示其與青光眼進(jìn)展之間的關(guān)聯(lián)程度，以及其作為預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展速度的生物標(biāo)志物的潛力。

為了探究線粒體功能紊亂對(duì)神經(jīng)退行性病變的潛在原因和后果，2024年5月英國(guó)國(guó)家健康研究所聯(lián)合倫敦大學(xué)眼科研究所、意大利阿伏伽德羅大學(xué)、瑞典圣埃里克眼科醫(yī)院等多中心開(kāi)展題為“Peripheral blood mononuclear cell respiratory function is associated with progressive glaucomatous vision loss”的外周血單核細(xì)胞的呼吸功能與進(jìn)行性青光眼性視力喪失相關(guān)研究，相關(guān)結(jié)果發(fā)表在《Nature medicine》上。

本研究中Seahorse XFe24 設(shè)備測(cè)量外周血單個(gè)核細(xì)胞中的氧氣消耗（OCR）量。為評(píng)估各組間OCR差異是否源于PBMC亞群構(gòu)成的不同，研究者使用美國(guó)Orflo Technologies公司的Moxi Go II快速流式細(xì)胞儀對(duì)所有受試者的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞群體進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并在 FlowJo 平臺(tái)上完成亞群分析，確保用于OCR檢測(cè)的細(xì)胞濃度準(zhǔn)確一致（8×10⁶ 個(gè)細(xì)胞/mL），保證線粒體呼吸功能檢測(cè)的可靠性。根據(jù)細(xì)胞大小設(shè)定門(mén)控參數(shù)，區(qū)分淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，驗(yàn)證青光眼患者與對(duì)照組 PBMC 亞群組成無(wú)差異，排除細(xì)胞類型混雜對(duì) OCR 結(jié)果的干擾（圖Supp Fig. 17）。
 

Supp Fig. 17 對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)：使用針對(duì)單核細(xì)胞（CD14）和淋巴細(xì)胞（CD3 – T cells、CD19 – B cells）的抗體作為陽(yáng)性對(duì)照，使用 IgG1 作為陰性對(duì)照（綠色）。
B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞（紅色和藍(lán)色群體）的大小在 5.5 - 8.5um之間，而單核細(xì)胞（橙色）則大于 8.5um。

無(wú)需鞘液，60 μl 精準(zhǔn)測(cè)定細(xì)胞計(jì)數(shù)，CV＜5%，讓 Seahorse XFe24 每孔 8×10⁴ 細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化“零偏差”，保障實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

內(nèi)置 561 nm 長(zhǎng)壽命激光，CD14/CD3/CD19 一鍵分型，實(shí)時(shí)質(zhì)控單核/淋巴細(xì)胞比例，排除樣本異質(zhì)性干擾。

免維護(hù)、免校準(zhǔn)，從采血到上機(jī) <15 min，COVID 期間也能高效完成 218 例臨床樣本。

本研究以外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）為模型，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性開(kāi)角型青光眼（POAG）患者 PBMC 線粒體耗氧率（OCR）顯著低于年齡匹配對(duì)照，正常眼壓型青光眼患者 OCR 更低；PBMC 總 NAD 水平亦下降，且與 OCR 呈強(qiáng)正相關(guān)。由此，PBMC 線粒體功能及 NAD 水平可作為預(yù)測(cè)青光眼進(jìn)展的新型血液生物標(biāo)志物。
 

美國(guó)Orflo Technologies公司是一家非常專業(yè)的細(xì)胞分析儀器研發(fā)和制造企業(yè)，擁有多項(xiàng)專利技術(shù)，產(chǎn)品以庫(kù)爾特原理的高精細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和超快流式細(xì)胞儀為主。

環(huán)亞生物，生命科學(xué)產(chǎn)品全國(guó)性代理商，不斷把國(guó)外頂級(jí)的創(chuàng)新產(chǎn)品引入中國(guó)。環(huán)亞生物具備完善的公司運(yùn)營(yíng)、產(chǎn)品管理、營(yíng)銷(xiāo)、售前技術(shù)支持和售后維修體系。作為Orflo Technologies中國(guó)地區(qū)獨(dú)家代理，環(huán)亞生物科技有限公司全權(quán)負(fù)責(zé)Orflo Technologies產(chǎn)品在中國(guó)地區(qū)的推廣、銷(xiāo)售，為廣大用戶提供專業(yè)的技術(shù)咨詢和產(chǎn)品服務(wù)。

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