AdCAR-T不靶向CD276的情況下避免CAR-T自相殘殺的機制研究

文章來源于公眾號：of studies             作者：of studies

我們所熟知的CART細胞自相殘殺大多發(fā)生在CD7、CD38這種血液腫瘤相關靶點中，今天看到JHO新發(fā)的一篇文章是關于避免CD276 CART自相殘殺的，很有趣。

CD276在小細胞肺癌SCLC等實體瘤中高表達，這項研究發(fā)現(xiàn)T細胞激活及CAR信號會誘導CAR-T細胞自身也表達CD276，導致自相殘殺（fratricide），從而限制抗CD276 CAR-T細胞的擴增與活性。

所以他們提出了一種避免自相殘殺的策略，可以一起看下。

1、CD276是小細胞肺癌理想靶點

• 79 例原發(fā)瘤 RNA-seq：CD276 表達顯著高于 DLL3。
• 四種分子亞型（SCLC-A/N/P/Y）細胞系均高表達 CD276，而 DLL3 表達不均。
• 流式證實 4 株 SCLC 細胞系表面 CD276 高陽性。
• 組織芯片（TMA，39 例）IHC：71.8% 樣本高表達 CD276（H-score 量化）。

體外擴增Ad CART培養(yǎng)時不添加AM，無靶抗原刺激，避免 CAR-T 被激活或耗竭，也消除自相殘殺風險�？色@得更高產(chǎn)量、更“年輕”的記憶表型（TCM/TSCM）細胞產(chǎn)品。

體內(nèi)給藥時引入 AM，注射 AM 后形成“AdCAR-T + AM”復合物，連接腫瘤細胞并觸發(fā)殺傷。

Fab適配分子AM 停藥后，快速清除，AdCAR-T 進入“休息”期，減少持續(xù)信號導致的耗竭。

可調(diào)給藥方案（間歇/持續(xù)），根據(jù)腫瘤負荷設計每日、隔日或“4-天給藥/3-天停藥”等方案，平衡療效與T細胞持久性。實現(xiàn)“遠程遙控”式的開關控制，提高安全性。

另外這個方案還有多靶點與序貫切換能力，通過更換 AM（不同 Fab）即可快速切換靶抗原，無需重新制備 CAR-T。為抗原異質(zhì)性或復發(fā)后抗原逃逸提供“現(xiàn)成”解決方案。這個策略也是可以應用到血液瘤的CD7的

dCAR-T（直接抗 CD276）體外擴增 6 天細胞數(shù)顯著低于 AdCAR-T 或未轉(zhuǎn)導 T 細胞。

激活的 AdCAR-T 中 15–20% 表達 CD276，主要見于 CD4+亞群。

重復刺激實驗顯示，CAR 信號本身可再次上調(diào) CD276。

用 CD276 Fab 或全長 mAb 處理 AdCAR-T后，死細胞↑、激活標志↑，證實自相殘殺機制。

3、新型 Fab-AM 的篩選與體外功能

人源 scFv 噬菌體庫 → 親和力成熟 → 5 個先導 Fab-AM（AM14/19/24/34/46）。

EC50 27–41 pM；AM46 殺傷 SHP-77 最優(yōu)且可持續(xù) 3 輪再挑戰(zhàn)（192 h）。

對 RH30、IMR-32、DMS114 等多系同樣有效；細胞因子分泌無異常升高。

獲得了高親和力、可量產(chǎn)、功能強的 AM46，用于后續(xù)體內(nèi)實驗。

4、AdCAR-T + AM46 體內(nèi)控制 SCLC 進展

NSG 小鼠尾靜脈 SHP-77-luc 模型中，dCAR-T 初期減瘤但迅速復發(fā)；

AdCAR-T 僅在有 AM46 時顯著抑制腫瘤并延長生存。

AM46 存在時 AdCAR-T 早期擴增，停藥后仍能被再次激活并清除二次攻擊瘤。

5、優(yōu)化給藥方案

6、IL-18 裝甲增強 AdCAR-T 功能


IL-18 裝甲通過增強 CD4⁺ 存活與記憶分化，進一步提升 AdCAR-T 的持久與再擴能力。

小結
AdCAR-T平臺可在不靶向CD276的情況下實現(xiàn)T細胞擴增，新型CD276靶向AM在體外和體內(nèi)均顯示出對SCLC的強效殺傷作用。與傳統(tǒng)CD276-CAR-T相比，間歇性AM給藥可使AdCAR-T在體內(nèi)保持功能持久性。此外，通過在AdCAR-T中引入激活誘導、AM遠程控制的IL-18分泌，可進一步增強其體內(nèi)擴增與抗腫瘤活性。