Collagenase, Type II膠原酶II
Collagenase, Type II膠原酶II 是一種來源于微生物的基質(zhì)金屬蛋白酶 (MMP) 和鋅肽酶。Collagenase, Type II膠原酶II 分解膠原蛋白1、3、5、7、8、10、纖連蛋白、明膠、聚集蛋白聚糖。
MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報，我們不為任何個人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)
生物活性
體外研究
Collagenase, Type II膠原酶II 用于分離骨、心、肝、甲狀腺和唾液腺等原代細(xì)胞的制備。
儲存液配制
1. 向 100 mg 膠原酶中加入 1 mL HBSS（Hank 平衡鹽溶液，含 Ca2+、Mg2+），震蕩使其充分溶解，制備成 100 mg/mL（即 100×）的儲存液；
2. 使用低蛋白結(jié)合性的 0.22 μm 濾膜過濾除菌，立即使用或分裝成小份量，于 -20°C 到 -5°C 避光凍存；
3. 使用前在冰上解凍，避免反復(fù)凍融。用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。
組織分離
1. 使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成 3-4 mm 大小的組織塊；
2. 利用含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS 洗滌組織塊數(shù)次；
3. 加入足量的含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4. 于 37°C 孵育 4-18 h。消化時使用水平搖床以及用 3 mM 的 CaCl2 補(bǔ)充消化可以提高消化效率；
5. 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于 37°C 繼續(xù)孵育，進(jìn)一步消化；
6. 利用不含膠原酶的 HBSS 洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度；
8. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
器官灌注
1. 向 37°C 預(yù)熱的含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS 中加入膠原酶，另添加 3 mM 的 CaCl2 有助于提高分離效率；
2. 按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；
3. 將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于 37°C 進(jìn)一步孵育。
4. 步驟同組織分離 6-8。
MCE 未對這些方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證，僅供參考。
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生物活性
體外研究
Collagenase, Type II膠原酶II 用于分離骨、心、肝、甲狀腺和唾液腺等原代細(xì)胞的制備。
儲存液配制
1. 向 100 mg 膠原酶中加入 1 mL HBSS（Hank 平衡鹽溶液，含 Ca2+、Mg2+），震蕩使其充分溶解，制備成 100 mg/mL（即 100×）的儲存液；
2. 使用低蛋白結(jié)合性的 0.22 μm 濾膜過濾除菌，立即使用或分裝成小份量，于 -20°C 到 -5°C 避光凍存；
3. 使用前在冰上解凍，避免反復(fù)凍融。用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。
組織分離
1. 使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成 3-4 mm 大小的組織塊；
2. 利用含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS 洗滌組織塊數(shù)次；
3. 加入足量的含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4. 于 37°C 孵育 4-18 h。消化時使用水平搖床以及用 3 mM 的 CaCl2 補(bǔ)充消化可以提高消化效率；
5. 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于 37°C 繼續(xù)孵育，進(jìn)一步消化；
6. 利用不含膠原酶的 HBSS 洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度；
8. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
器官灌注
1. 向 37°C 預(yù)熱的含 Ca2+、Mg2+ 的 HBSS 中加入膠原酶，另添加 3 mM 的 CaCl2 有助于提高分離效率；
2. 按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；
3. 將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于 37°C 進(jìn)一步孵育。
4. 步驟同組織分離 6-8。
MCE 未對這些方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證，僅供參考。
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