五色多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒助力多維度解析乙肝免疫調(diào)控新機(jī)制

文獻(xiàn)標(biāo)題：The core cellular network modulates immune phenotype switching in hepatitis B
發(fā)表期刊：Science Bulletin（IF 21.1）
DOI：https://doi.org/10.1016/j.scib.2025.03.038
核心試劑：五色多重?zé)晒饷庖呓M化試劑盒（abs50013）、檸檬酸鈉-EDTA抗原修復(fù)液（abs9249）

一、研究思路：多維度解析乙肝免疫表型轉(zhuǎn)換的核心邏輯
乙肝病毒感染的臨床異質(zhì)性極強(qiáng)，不同階段（免疫耐受期 IT、免疫活動(dòng)期 IA、非活動(dòng)期 ICI 及急性乙肝 AHB）的免疫狀態(tài)差異顯著，但其核心調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明。本研究團(tuán)隊(duì)以 “臨床樣本分層 - 多組學(xué)技術(shù)整合 - 功能驗(yàn)證” 為核心思路，構(gòu)建了全面的研究體系：

樣本體系：收集 18 例乙肝患者肝活檢樣本、15 例配對(duì)外周血樣本（覆蓋 IT/IA/ICI/AHB 四階段），以及健康對(duì)照樣本，嚴(yán)格排除干擾因素確保樣本純度；

技術(shù)矩陣：整合單細(xì)胞 RNA-seq、空間轉(zhuǎn)錄組、多重免疫組化、TCR/BCR 測(cè)序、體外 PBMC 刺激等技術(shù)，實(shí)現(xiàn) “細(xì)胞亞群 - 基因表達(dá) - 空間定位 - 功能驗(yàn)證” 的全鏈條解析；

核心目標(biāo)：揭示乙肝不同階段肝內(nèi)及外周免疫細(xì)胞的表型特征、細(xì)胞間互作網(wǎng)絡(luò)，明確調(diào)控免疫表型轉(zhuǎn)換的核心通路與分子機(jī)制。

關(guān)鍵技術(shù)流程示意圖：

二、核心研究成果：乙肝免疫調(diào)控的三大關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)
1. CD8+T 細(xì)胞亞群分異主導(dǎo)免疫狀態(tài)轉(zhuǎn)換
研究首次明確肝內(nèi) CD8+T 細(xì)胞分為兩大核心亞群：

• GZMK+ CD8+T 細(xì)胞：在 AHB 和 IA 階段占比更高，具有肝駐留性和耗竭表型（高表達(dá) CXCR6、PDCD1），通過 FasL/Fas 或 IFN-γ 介導(dǎo)細(xì)胞毒性；
• GZMB+ CD8+T 細(xì)胞：在 IT 階段富集，依賴穿孔素發(fā)揮細(xì)胞毒性，且與臨床炎癥指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。

通過偽時(shí)間軌跡分析，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)乙肝特異性 CTL（hpCTL）存在三種細(xì)胞狀態(tài)，IA 階段以 FASLG+ State3 為主，IT 階段以 GZMB+PRF1+ State1 為主，為不同階段免疫干預(yù)提供了靶點(diǎn)（對(duì)應(yīng)原文圖 S3a、S8）。

2. 多細(xì)胞互作網(wǎng)絡(luò)調(diào)控免疫耐受與激活

• 肝細(xì)胞：門脈周圍肝細(xì)胞（Hep2）在 IT 階段 HBV 感染率更高，MHC-I 基因高表達(dá)但共刺激分子（CD40、CD80）低表達(dá)，介導(dǎo) CD8+T 細(xì)胞功能障礙；
• 巨噬細(xì)胞：MRC1+CDH5 + 枯否細(xì)胞高表達(dá)抗原提呈相關(guān)分子（HLA、TAP1）及共刺激分子，在 AHB/IA 階段增強(qiáng) IL-2 信號(hào)，可挽救 CD8+T 細(xì)胞功能；
• 調(diào)控通路：IA 階段 PGE2-EP4 信號(hào)通路激活（血漿 PGE2 水平與 ALT 正相關(guān)），抑制 CD8+T 細(xì)胞細(xì)胞毒性；IL-33 + 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞、DC-SIGN + 巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的 2 型免疫抑制在 IA 階段顯著增強(qiáng)（對(duì)應(yīng)原文圖 S5、S6）。

3. 臨床關(guān)聯(lián)：免疫細(xì)胞亞群與疾病進(jìn)展密切相關(guān)
CD8 + 耗竭 T 細(xì)胞、Treg、CXCL13+ Tfh 細(xì)胞與血漿 ALT 水平、肝組織炎癥分級(jí)呈正相關(guān)，而 GZMB+ CD8+T 細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)，為乙肝臨床預(yù)后評(píng)估提供了潛在生物標(biāo)志物（對(duì)應(yīng)原文圖 S11）。

三、Absin 產(chǎn)品賦能關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)：多重免疫組化的核心工具
本研究中，多重免疫組化技術(shù)作為解析肝內(nèi)細(xì)胞定位與表型的關(guān)鍵手段，離不開 Absin 兩大核心產(chǎn)品的穩(wěn)定支持：
1. 核心產(chǎn)品清單

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號(hào)	應(yīng)用場(chǎng)景
TSA 5-color kit	abs50013	多重免疫組化熒光染色
Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution	abs9249	甲醛固定石蠟切片（FFPE）抗原修復(fù)

2. 產(chǎn)品在研究中的核心作用
（1）Citrate-EDTA 抗原修復(fù)液（abs9249）：實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)保障
應(yīng)用環(huán)節(jié)：肝組織 FFPE 切片多重免疫組化前處理；
核心作用：甲醛固定會(huì)導(dǎo)致抗原表位交聯(lián)遮蔽，abs9249 通過檸檬酸鹽 - EDTA 緩沖體系，在微波加熱條件下高效修復(fù)抗原表位（原文步驟：“transferred to preheated Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution (abs9249, Absin) before being heat-treated using a microwave for 15 minutes”），確保后續(xù)一抗能夠特異性結(jié)合靶標(biāo)分子；
實(shí)驗(yàn)價(jià)值：為 CD8、GZMK、GZMB 等關(guān)鍵標(biāo)志物的高效檢測(cè)奠定基礎(chǔ)，是免疫染色信號(hào)清晰的前提。

（2）TSA 5-color kit（abs50013）：多標(biāo)志物同步可視化的核心工具
應(yīng)用環(huán)節(jié)：肝組織中 CD8+T 細(xì)胞亞群及功能分子的多重標(biāo)記；
核心作用：采用酪酰胺信號(hào)放大（TSA）技術(shù)，可在同一張切片上同時(shí)檢測(cè) 5 種靶標(biāo)（CD8、GZMK、GZMB、Transferrin、DAPI），通過不同熒光通道區(qū)分，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞亞群定位與功能表型的同步分析（原文步驟：“paired with TSA 5-color kit (abs50013-20T, Absin). Finally, they were stained with DAPI”）；
實(shí)驗(yàn)價(jià)值：清晰呈現(xiàn) GZMK+ CD8+T 細(xì)胞、GZMB+ CD8+T 細(xì)胞在肝組織中的空間分布，以及與肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的共定位關(guān)系，為 “細(xì)胞互作調(diào)控免疫表型” 的結(jié)論提供直接可視化證據(jù)（對(duì)應(yīng)原文圖 S2c：CD8+T 細(xì)胞亞群染色結(jié)果；圖 S4i：肝組織中關(guān)鍵分子表達(dá)定位）。

3. 對(duì)應(yīng)原文關(guān)鍵圖片展示

原文圖片	圖片內(nèi)容	Absin 產(chǎn)品貢獻(xiàn)
圖 S2c	乙肝患者肝組織中 CD8+T 細(xì)胞亞群（GZMB+、GZMK+）熒光染色結(jié)果	abs9249 保障抗原暴露，abs50013-20T 實(shí)現(xiàn)多標(biāo)志物同步顯色，清晰區(qū)分不同功能 CD8+T 細(xì)胞
圖 S4i	肝組織中 AREG、EGFR 等分子的空間表達(dá)定位	TSA 試劑盒的高靈敏度熒光信號(hào)放大，確保低表達(dá)靶標(biāo)的有效檢測(cè)
圖 S1b/d	肝內(nèi)細(xì)胞亞群聚類及不同階段占比分析	多重免疫組化結(jié)果為單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞類型注釋提供驗(yàn)證依據(jù)

四、Absin：科研探索的可靠合作伙伴
本研究通過多維度技術(shù)解析乙肝免疫調(diào)控機(jī)制，其成果的發(fā)表離不開精準(zhǔn)高效的實(shí)驗(yàn)工具支持。Absin 的 TSA 多重染色試劑盒與抗原修復(fù)液，憑借穩(wěn)定的性能、高效的效果，成功助力研究團(tuán)隊(duì)完成肝組織多標(biāo)志物的精準(zhǔn)檢測(cè)，為核心結(jié)論的驗(yàn)證提供了關(guān)鍵技術(shù)支撐。

在免疫表型分析、腫瘤微環(huán)境解析、傳染病免疫機(jī)制等研究領(lǐng)域，Absin 始終以 “提供高品質(zhì)科研工具” 為核心，持續(xù)優(yōu)化免疫組化、流式檢測(cè)、分子生物學(xué)等系列產(chǎn)品，助力科研人員突破實(shí)驗(yàn)瓶頸，加速科研成果轉(zhuǎn)化。

未來，Absin 將繼續(xù)深耕生命科學(xué)研究需求，推出更多適配前沿技術(shù)的創(chuàng)新產(chǎn)品，與全球科研工作者攜手，探索生命奧秘，推動(dòng)醫(yī)學(xué)進(jìn)步！

文中使用產(chǎn)品

貨號(hào)	名稱	規(guī)格
abs50013	五色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒	20T/50T/100T
abs9249	檸檬酸鈉-EDTA抗原修復(fù)液	100mL

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